流式应用老瓶装新酒-利用 Annexin V和Propidium

Cold Spring Harb Protoc;

doi:10.1101/pdb.prot087288

关键字：凋亡，坏死，流式细胞仪

概述： 

健康细胞的表面由脂质组成，脂质不对称地分布在细胞膜的内层和外层。这些脂质中的一种， 其中磷脂酰丝氨酸(ps)通常支分布于质膜内层。 在细胞凋亡过程中，脂质不对称性消失，会导致ps层外露于质膜外层。 Annexin v，一种36 KD 的钙结合蛋白，特异与 ps 结合，因此，荧光标记的 annexin v 可用于检测凋亡细胞外暴露的 ps。由于坏死的细胞也具有破裂的膜，因此Annexin v也会进入整个质膜。 但是，由于 PI 作为不透膜的染料只能进入坏死细胞而被排除在早期凋亡细胞之外，因此与PI共染色可以区分出凋亡细胞和坏死细胞。本文描述了如何利用利用 Annexin V和PI染色后，通过流式细胞术检测和定量凋亡和坏死细胞。

至于为什么要写一个如此基础的流式应用，实在是因为一千个实验员做凋亡，真心有一千个问题和结果，那么哪一个是对的呢？为了解决掉这个问题，小编就选中了这篇文献，希望给大家一个完美的答案。

做在详细描述操作步骤之前，小编要强调两点：1 凋亡是一个在几个小时内就发生完的动作，因此如果实验目的是检测早凋的话，一定要注意刺激的时间，推荐与实验先做刺激剂的药物时间，浓度曲线。2 想要检测出来凋亡和坏死的细胞，我们的样本细胞必须是活细胞，至于原因，大家都清楚吧。下面我们正式开始：

知道了，我们检测的群体中既有凋亡细胞又有坏死，那么是不是可以用更精细的方式将调往和坏死的细胞进行细分呢？请期待小编的下次文献分享啊。