2020-11-20

最近跑了很多次PCR，但是都懒得分析，要分析一下结果啦！

抑制剂和激动剂都到货了，开始摸条件啦啦啦。不过话说回来，做到现在，第一步s促使A上调的这一步都还没做好，真是有点困惑了，难道是实验本身的问题？或者是处理的问题？

跟师姐聊了聊，M作为刺激剂，他其实已经是第二步的刺激了，他所做的只是当你细胞内预存pro-IL-1β的时候，它把PRO-IL-1β切割成IL-1B，而产生前白介一需要第一信号的刺激。可是我们给刺激的时候只给MSU，不给第一信号刺激，所以最后得到的IL-1B上调也不是非常明显，这就很气。

所以接下来要解决的问题：

①单纯的MSU刺激是否足够作为刺激？是否要加入LPS作为第一信号？可是LPS本身就是强致炎物，是否要设置单纯LPS组看对比？或者是用小剂量LPS，不致炎而仅让他预存一些前白介一？……好难哦。

②分析PCR结果。

已解决问题：

①AICAR的体外实验使用的浓度一般为多少？

IF=6.3 huh7、mhcc97h细胞 1mM 24h

IF=12 U2OS人类骨肉瘤细胞系 1mM 3h  28561066

IF=11.8 小鼠肺部肿瘤细胞（自提） 0.5mM 24h 32568216

IF=5.6                                            5uM 12h

②50mgAICAR应该加多少什么溶剂，溶解成100mM的溶液？

50mgAICAR溶入1ml DMSO 得到193.6258mM的储存液。取100ul储存液，加入93.63ul，成为100mM工作液。

③Compound C体外实验使用的浓度一般为多少？

官网推荐：

mouse C2C12 cells 4uM

IF=4.5 NRK细胞 10uM 2H

IF=21.56 肝细胞系L02 4uM

IF=4.8 THP-1细胞系 2.5uM    32950971

IF=4.8 小鼠心肌原代细胞 10uM 2h

④10mgCompound C应该加多少什么溶剂，溶解成多少浓度的溶液合适？

用1ml水溶解10mg得到21.17mM的储存液。

取100ul储存液，加入958.5dd水，获得2mM的工作液

用水溶，10mg溶于21.17ml水，浓度为1mM。往2ml的体系里加入10ul得到5uM的浓度。

⑤有什么可信度比较高的检测药物对细胞活力影响的实验？

CCK-8。但是他是测线粒体脱氢酶活力的，AMPK本身就调节代谢，可否测？话说回来，测细胞活力一般是看刺激物的毒性，在本实验是MSU，而不是保护剂的毒性……保护剂要是有毒性它保护了个寂寞？