2022-09-09 CFSE检测一定要用CD3CD28bead
2022-09-10 本文已影响0人
小牛学生信
这篇推文来源于一段很长的故事，有多长呢，也就清明节到中秋节这么长。
CFSE法检测淋巴细胞增殖 必知必会
1 CFSE检测一定要用CD3CD28beads
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图 1：该产品通过利用两个激活信号 CD3 和 CD28 模拟抗原呈递细胞（上图）的体内 T 细胞活化，
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结合到与抗原呈递细胞大小相似的三维珠子（下图）。
清洗磁珠
清洗 Dynabeads® 磁珠 使用前清洗 Dynabeads® 磁珠。
1. 重悬小瓶中的磁珠（即涡旋 > 30 秒，或倾斜旋转 5 分钟）。
2. 将所需体积的磁珠转移到试管中。
3. 加入等体积的 Buffer，或至少 1 mL，并混合（涡旋 5 秒，或在滚筒上保持至少 5 分钟）。
4. 将试管放在磁铁上 1 分钟，弃去上清液。
5. 从磁铁上取下试管，将洗涤过的磁珠重新悬浮在与从小瓶中取出的磁珠初始体积相同的培养基中（步骤 2）。
激活小鼠 T 细胞
1. 在 96 孔组织培养板中加入 100–200 μL 培养基中的 8 × 104 纯化 T 细胞。
2. 加入 2 μL 预洗并重悬的 Dynabeads® 磁珠，使磁珠与细胞的比例达到 1:1（参见表 1）。
3. 根据您的具体实验要求，在 37°C 的加湿 CO2 培养箱中培养。
4. 收获活化的 T 细胞并直接用于进一步分析。
5. 对于流式细胞仪应用，在染色前取出磁珠。 将管子放在磁铁上 1–2 分钟，以将珠子与溶液分离。 将含有细胞的上清液转移到新试管中。
注意：为了增加上清液中 T 细胞的回收率，请在磁分离前通过移液器彻底重悬珠子/细胞悬液（一些细胞在激活后与珠子紧密结合 2-3 天）。
为了进一步提高细胞回收率，过夜培养珠结合细胞部分并重复步骤 5。
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参考资料：来源于
