WB代替技术：鹿明PRM靶向蛋白组学服务

如今，蛋白组学的研究大多都是利用基于质谱的bottom-up的方法进行研究，其中最为常见的是基于高效液相色谱的鸟枪法。

LC-MS/MS具有强大的蛋白定性能力，但是在定量上其灵敏度仍有待提高。

近年来，基于质谱的多重靶向蛋白质组学技术，在蛋白精准定量上的展现了更高的灵敏度以及良好的重现性。

选择反应监测（selected reaction monitoring，SRM）是靶向蛋白组学的金标准，平行反应监测 (Parallel reaction monitoring，PRM)是其衍生技术。

PRM技术在整个液相分离过程中会不断地对每一个目标母离子的全部碎片离子图谱进行记录。相比于SRM只检测目标离子对的模式，PRM检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。PRM技术依赖于高分辨率的质谱仪，需要仪器的扫描速度足够快，以便在高效液相色谱中能够获得足够多的数据点。

PRM主要的优势就是使用了超高分辨率的Orbitrap质量分析器，其能够将干扰信息与真实的信号进行区分，以及相比于传统的SRM方法能够更好的保证分析的选择性。其缺点是能够监视的母离子的数量取决于Orbitrap分析器的工作循环或瞬时长度以及色谱条件，不过其数量能够通过利用time-scheduling、parallelization和降低Orbitrap的分辨率来增加。

图1. PRM实验原理图示

01.PRM技术的优势

在高通量的检测过程中保证定量的灵敏度和特异性；

与SRM相比，不需要母离子/子离子对，仅需要母离子信息，实验设计更简单；

可通过二级全扫描定性定量，在复杂背景中抗干扰能力强，分辨率高；

可根据需求选择加入合成的标准肽段，节约实验成本；

PRM技术重现性好，可以在多次重复检测中保证结果的稳定性。

02.PRM应用领域

细菌磷酸化蛋白组学重现性检测

组氨酸修饰定量检测

大鼠酰肉碱定量检测

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03.PRM的流程

确定待验证的蛋白，一般可以通过以下几个途径获得：shot gun鉴定信息、分子生物学实验等（客户提供）。

选取合适的实验组和对照组蛋白样品，提取样品中总蛋白，DDA检测。

根据DDA搜库结果，结合文献、数据库信息挑选可靠的靶向肽段（每个蛋白2-5个肽段）。

按照一定的比例在样品肽段中加入内标iRT，进行PRM检测。

检测结果分析，包括内标iRT质控、样品重复性检验等。

图2. PRM靶向定量蛋白质组学分析基本流程

04.送样要求

文献阅读推荐：

Integrated proteomic analysis of post-translational modifications by serial enrichment.(IF:26.919)