Paper-51 厌氧微生物的遗传操作：人肠道细菌Eubacte

2021-06-07 本文已影响0人 RashidinAbdu

Sheridan PO, Martin JC, Minton NP, Flint HJ, O'Toole PW, Scott KP. Heterologous gene expression in the human gut bacteria Eubacterium rectale and Roseburia inulinivorans by means of conjugative plasmids. Anaerobe. 2019 Oct;59:131-140. doi: 10.1016/j.anaerobe.2019.06.008. Epub 2019 Jun 19. PMID: 31228669.

摘要：
厚壁菌门中的共生丁酸生产菌在人体肠道内大量存在，对维持人体健康具有重要意义。然而，由于缺乏基因改造技术，对这些细菌的代谢和宿主相互作用的了解受到限制。
在这里，通过：将接合质粒从大肠杆菌供体转移到严格厌氧的人类结肠壁厚壁菌的一个重要亚群的代表，实现了自主复制穿梭载体的转移。
五种不同的质粒穿梭载体进行了测试，每一个携带不同来源的复制革兰氏阳性细菌。将质粒pMTL83151（pCB102复制子）成功地导入两株Eubacterium rectale中，同时将pMTL83151和pMTL82151（pBP1复制子）导入Roseburia inulinivoransA2-194中β-(构建了1,3-1,4）-葡聚糖酶基因，并将其与Roseburia inulinivoransA2-194和Eubacterium rectaleT1-815结合，成功地在这两株产丁酸的厚壁菌中异源表达了这种酶活性。
链接：
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1075996419301052?via%3Dihub#!

Sheridan P , J Martin, Scott K . Conjugation Protocol Optimised for Roseburia inulinivorans and Eubacterium rectale[J]. BIO-PROTOCOL, 2020, 10(7).

人体肠道微生物群中的蔷薇属和真杆菌属在维持人体健康方面发挥着重要作用，部分是通过产生丁酸盐来实现的，丁酸盐是我们结肠上皮细胞的主要能量来源。然而，由于缺乏基因操作技术，我们对这些细菌的生物化学和生理学知识受到限制。
以往引入Roseburia的共轭转座子不易修饰，极大地限制了其作为遗传修饰平台的适用性。模块化质粒穿梭载体已被开发用于梭状芽胞杆菌属，与Roseburia属和Eubacterium属具有相同的分类顺序，提高了这些载体用于这些生物体的可能性。在这里，我们描述了一个优化的结合协议，使转移自主复制质粒从一个E。
大肠杆菌供体菌株转化为Roseburia inulinivorans和Eubacterium rectale。质粒的模块化性质及其通过自主复制在受体细菌中保持的能力使其成为研究异源基因表达的理想选择，并作为其他遗传工具（包括反义RNA沉默或移动组II基因间破坏策略）的平台。