设计Gateway引物

需要用到snapgene软件进行设计。

1.打开目的基因CDS的fasta文件（snapgene）；

2.点击上方工具栏中的action-Gateway cloning-BP cloning；

打开Gateway cloning设计引物

3.全选序列（ctrl+A即可），点击上方Donor Vector；

4.在右方选择克隆载体（pDONR221）；

5.点击上方Entry clone，choose primers-选择Tm（60°）-即可得到primers；

6.点击primer即可得到引物。

得到attB引物