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星空很美，美得不像话。在如此纬度的我们，貌似一辈子也无法亲眼看见。期待终有一天，自己可以记录如此绚烂的星空。
说实验，跑偏了。最近在做的实验，验证转录因子的转录激活能力，所以又有点想说的，就记录下来了。

1. 实验的材料

• AH109感受态细胞（你可以自己做酵母感受态，也可以买公司做好的，直接转化就可以），关于AH109菌株的介绍，可以看我之前写得简单文章。
• 培养基，就是用clontech公司的产品，酵母基本培养基及各种氨基酸缺陷的氨基酸，这家公司的说明书已经很详细，这里不再说明。
• Carrier DNA以及聚乙二醇/醋酸锂等试剂。
• X-α-gal和3-AT。

2. 转化步骤（直接省略，看说明书）

3. 挑单克隆鉴定转化是否成功

一般我还是会去做一下菌液PCR，来确定目的基因确实转化进去了。当然，这还是会有点浪费时间的，我在这里就直接将扩增好的单克隆菌液直接涂布在两者板上-TRP和-TRP/-HIS，直接进行筛选同时如果有全都生长的很好，且出现蓝色（含X-α-gal时），则能说明转化成功且有激活作用。（这里很关键的一点是，你必须要加3-AT，否则出现假阳性的结果可能性相当大，我在这次实验中就出现了假阳性，后面看图）

4. 涂缺陷板

• 配置4 mg/ml的X-α-gal和5 M的3-AT母液（X-α-gal是用来蓝白斑显示的，3-AT可以竞争性结合His，减少假阳性的出现）
• 两者可以都在配培养基的时候加入其中，我一般是将3-AT直接加入其中（100ml加入母液80ul），这里的浓度还是需要摸索的，可能不同的基因能力也不同，本次式样中，我的浓度4 mM就抑制了假阳性的菌株。而X-α-gal可以直接用4 mg/ml的浓度直接均匀涂抹在缺陷板上。

注意：这里的3-AT一定要添加，不然很可能出现假阳性，得出错误的实验结论。可以看到明显是抑制住了，第一排的菌。我发现，第一排的菌确是也长的慢，慢慢地后来也出现了蓝色，很明显差好多。这就是假阳性的预示。

没有添加3-AT
添加3-AT

5. 总结

很多时候，为什么说有些人一看就知道，你的实验结果不可靠，这不是没有道理的。自己做过实验，遇到过各种状况，所以一切显得很明了。别人的经验，还是能够帮助你少走很多弯路，但是有时候你可能不服，自己内心不是特别想听，也想知道不这样做行不行。当然，有时候可以没有问题，但是一旦问题出现的时候，你才会明白。