三十六策 第 4 策 分子点睛

三十六策 第 4 策 分子点睛

第 4 策 分子点睛

疾、型、模、法、标五恒量是一个研究方向的通用体系、常规套路。

分子这里主要是指 DNA，RNA，蛋白这些生物大分子。

第一个问题，怎么来证明一个分子有某个方面的功能表型?

变量代入恒量，最基本的科学假设，就是在什么疾病中分子能够介导某种表型。证明一个分子有某个方面的功能表型的方法，就是操作分子，人为的改变这个分子的表达，让这个分子表达上升，观察到表型， 然后再把这个分子表达降低，观察到表型消失了，这就证明了表型的存在与分子的上下表达有明显的相关性，由此你可以下结论。

验证分子和表型的关系，需要通过操纵分子观察表型来建立因果关系。

过表达：在一个细胞模型中过表达一个分子的手段一共有两类，一是质粒，二是病毒。

• 质粒：是一种环状的 DNA 分子，能够把一段特定序列编码 DNA 转录出 RNA 来，接着 RNA 再翻译成蛋白。把质粒导入细胞→转染：脂质体、电穿孔、钙转。转染 Transfection，转导 Transduction， 转化 Transformation（质粒在大肠杆菌里做转化）。

• 病毒：为了对付一些难以转染的细胞。目的都是为了运输 基因到细胞里，实现基因的过表达。

正反双向研究：围绕一个分子找到相对高表达的和相对低表达的细胞，在高表达的里面抑制分子，在低表达的里面过表达分子就能实现正反双向研究。

RNAi ：合成一段 21 个碱基的 siRNA，转染到细胞里就能对目标基因实现 70%以上的表达沉默。

第二个问题，分子有很多具体类型

• DNA：

  • 肿瘤中 DNA 的突变，缺失，重排已经被证明是一大驱动因素。

  • 表观遗传学是指基因序列不变情况下，基因表达水平的改变：DNA 甲基化，RNA 编辑，蛋白修饰

• RNA

  • 编码基因的 mRNA

  • 非编码 RNA：miRNA、lncRNA、circRNA

总结

证明分子与表型之间关系的 Gain of function 和 Loss of function 一正一反两种方法