2021-11-20

hieff clone PLUS one step cloning kit  使用说明记录

产品描述：50bp-10kb 都可以，需要15-25bp 的同源臂。

1线性化载体：克隆位点上下游25bp区域内GC含量最好在40%-60%，质粒酶切或者反向PCR

2：插入片段，必须用高保真酶，前后同源臂设计好

3 ：重组反应

载体=0.03pmol  片段=0.06-0.09pmol  

载体=0.02*载体碱基对数

pBE-3AES+gus=10900+1812=12712    0.02*12700=250ng

片段ipone15pro=2.3k*0.04-0.06=92-132ng

反应体系再冰上配置

重组反应注意事项：体系配好后，轻轻吸打混匀，然后短暂离心。

50度PCR仪，20m  4度保存，当插入片段大于5k，孵育25m

完成后冰浴5min。

这世界时候，拿DH5a 克隆感受态，冰上融化，取10ul 重组产物，加入到100ul感受态中，轻弹管壁数下混匀。冰浴30m

42度热激45s。，冰浴2min，加200LB

,37度孵育10min充分复苏，然后再摇菌50min。涂板