ILC2s amplify PD-1 blockade by a

继续哈。

接下来，作者研究了rIL33治疗是否具有相似的组织特异性抗肿瘤作用。rIL33治疗阻止了原位PDAC小鼠的肿瘤形成并延长了生存时间，但对皮下PDAC小鼠没有影响

rIL33在KPCOVA PDAC小鼠中具有相似的组织特异性抗肿瘤作用

优先激活IL18R+皮肤ILC2s 的细胞因子rIL18限制了IL18R+ILC浸润的皮下PDAC的生长，但不限制缺乏IL18R+ILC的原位PDAC的生长。

rIL33选择性地在DLN和肿瘤中扩增ILC2，但不在原位PDAC小鼠的脾脏或皮下PDAC小鼠的任何器官中。

ILC2的expansion伴随着瘤内CD8+T细胞细胞因子能力的增强和PD-1的上调，而其他瘤内免疫细胞没有一致的变化。

与ILC2s间接激发抗肿瘤CD8+T细胞一致，rIL33治疗使瘤内CD103+树突状细胞(DC)的数量翻了一番，它将CD8+T细胞激发并招募到PDACs7中，

为了确定rIL33的作用是否依赖于ILC2s，作者用了一种鼠Rorafl/flIl7rCre/+ mice，这种鼠结构性缺失ILC2s，ILC2缺陷抵消了rIL33的作用，并减弱了肿瘤中CD103+DC的增加。

在CD103+DC缺陷的BATF3−/−小鼠中，rIL33也没有抗肿瘤作用，也不能诱导CD8+T细胞表达PD-1，表明CD103+DC对于rIL33介导的肿瘤控制是必不可少的。

为了测试TILC2s是否产生趋化因子来将DC招募到肿瘤中，作者使用了单细胞RNA-seq，发现rIL33激活的TILC2s保留了ILC2身份的标记，但表现出不同的转录图谱，并选择性表达CCL5。大佬的世界，我不懂。

CCL5在体外招募CD103+DC进入肿瘤18，并诱导有效的DC迁移。综上所述，这些数据表明，rIL33扩增TILC2以产生CCL5，潜在地将CD103+DC招募到肿瘤中，并激活CD8+T细胞以诱导治疗性肿瘤免疫。

由于rIL33刺激ILC2具有抗肿瘤作用，因此作者寻找进一步激活ILC2的策略。最近的数据表明，像T细胞一样，ILC2通过共抑制免疫检查点途径调节它们的活动。具体地说，免疫检查点PD-1调节小鼠ILC2的发育并形成效应细胞ILCs，当PD-1基因缺陷或被封闭抗体(抗PD-1)抑制时，IL33激活的ILC2s在小鼠和人类20中显示出更多的expansion and effector function。在人类肿瘤中也发现PD-1+ILC2。抑制ILC2上的免疫检查点用于癌症治疗还没有被探索过。

使用scRNA-seq，作者发现PD-1是TILC2在基线表达的唯一可检测到的共抑制分子。

rIL33处理上调了一部分TILC2上的PD-1，但不上调DLN ILC2上的PD-1，表明PD-1可能在功能上抑制了活化的TILC2（为什么啊？）

作者测试了rIL33与抗PD-1联合治疗是否可以协同激活TILC2以增强抗肿瘤效果。与PD-1仅在rIL33激活的TILC2上的表达一致，单独的抗PD-1诱导了部分抗肿瘤反应，但对TILC2的频率没有明显的改变。rIL33和抗PD-1的组合最大限度地扩大了肿瘤和DLN中的ILC2，与单独使用抗PD-1相比，增强了肿瘤控制

为了研究抗PD-1抗体是否通过细胞内源性PD-1阻断激活ILC2，作者比较了体内处理后TILC2和DLN ILC2的单细胞转录谱。尽管TILC2s保持了ILC2s的转录和细胞特性，但与所有其他治疗条件和组织部位相比，rIL33和抗PD-1在PDAC小鼠的TILC2s中诱导了独特的转录表型，并增加了ILC2标志物、典型的(两性调节蛋白(Areg))和非典型的(Cxcl2)ILC2效应分子的表达，细胞激活机制(JunB、Fosl2和YBX1)和共抑制免疫检查点

在ILC2基因缺陷的小鼠上取消了双重治疗的抗肿瘤作用。这表明ILC2对于双重抗PD-1和rIL33治疗的疗效是必要的。这些结果表明，抗PD-1可能通过抑制ILC2上的PD-1途径而不是T细胞上的PD-1途径来放大活化的TILC2。

为了研究阻断激活的TILC2上的PD-1途径是否有助于双重治疗的抗肿瘤效果，将分选纯化的rIL33激活的富含PD-1(野生型)或PD-1缺陷(Pdcd1-/-)TILC2转移到荷瘤ILC2缺陷的小鼠中。转移野生型TILC2没有抗肿瘤效果，但转移Pdcd1−/−TILC2s限制了肿瘤的生长，表明阻断TILC2s上的PD-1信号可以增强肿瘤控制

接下来，作者检测了rIL33激活的PD-1+TILC2是否可以在已建立的肿瘤中直接放大抗PD-1治疗的疗效。将分类纯化的rIL33激活的同源CD45.1+TILC2s转移到CD45.2+ILC2缺陷的小鼠体内，并在转移后用抗PD-1治疗。PD-1+TILC2的转移增强了抗PD-1治疗的效果，抑制了肿瘤的生长，并增加了受体小鼠肿瘤和DLN中的T细胞频率，但不增加脾脏中的T细胞频率。

转移的TILC2超过97%的PD-1+，在接受抗PD-1治疗的小鼠的肿瘤和DLN中蓄积，但不在脾脏中蓄积，并在转移后持续长达9周

这些数据表明，阻断rIL33激活的TILC2上的PD-1信号直接增强了抗PD-1治疗的抗肿瘤效果。

为了检验rIL33和抗PD-1治疗在IL33Low，抗PD-1耐药肿瘤中的疗效，作者选择了一种侵袭性的"冷"PDAC肿瘤模型(KPC 52小鼠)，该模型产生IL33Low肿瘤，CD8+T细胞比IL33High肿瘤少50%，并且中位生存期仅为2周用来模拟人IL33low的人PDAC肿瘤。

虽然KPC 52PDAC小鼠没有表现出自发KPC小鼠中看到的从侵袭前肿瘤到侵袭性PDAC的PDAC肿瘤发生的顺序步骤，但它们概括了自发KPC小鼠和人PDAC中看到的抗PD-1耐药性，rIL33和抗PD-1联合治疗使这些小鼠的肿瘤体积减少了50%以上，存活率提高了近50%。

最后，为了评估使用双重rIL33和抗PD-1治疗PDAC患者的可能性，作者调查了PD-1+TILC2和PD-1+T细胞在人PDAC中的共存情况。近60%的人PDAC具有PD-1+TILC2和PD-1+T细胞的低频率，这两种细胞类型之间存在显著的相关性，此外，IL33mRNA与PDCD1mRNA密切相关，PD-1的表达与较长的生存期相关22，这表明IL33-PD-1轴可能对PDAC患者的生存期有积极影响。

综上所述，rIL33激活的ILC2可以在对PD-1部分敏感和PD-1耐药的肿瘤中放大对抗PD-1的反应。

文章到此结束，大佬的文章，读起来非常难懂，并且枯燥，书读百遍，其义自见，咱们，明天再总结总结。欢迎批评、指正。