新冠核酸检测——PCR实验室建设指南
一、PCR实验室建设指南
1.实验室设置说明及建议
1.1 标准PCR实验室为四区，即试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区。
1.2 若面积不足，二区、三区分配空间可适当扩大，台面及配套仪器放以实际情况自行设定。
1.3 建议通道及实验室间墙都采用铝槊或铝合金加玻璃，采用推门,这样可达到美观、经济、采光好、占地少的优点。
2.临床基因扩增实验室平面参考图
3.PCR实验室设计主要控制要素
3.1实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
3.1.1试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
3.1.2标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。
3.1.3扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
3.1.4扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
实验室污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源并清除为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。
3.2工作区域的严格划分
3.2.1各个实验区域设置合理；
3.2.2各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
3.3合理的系统设置
合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。
3.4规范的操作
3.4.1临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作；
3.4.2在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施；
3.4.3清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。
3.5严格的管理
3.5.1严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；
3.5.2在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域；
3.5.3尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
3.5.4扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等；
3.5.5扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。
3.6完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。
4.实验室规划要求和设计原则
4.1实验室规划要求
4.1.1各区配置空调且要求独立
4.1.2各区天花板上安装2个紫外线灯
4.1.3缓冲区天花板上安装2个紫外线灯
4.1.4各区配置干湿温度计
4.1.5冰箱各室配置冰箱温度计
4.1.6各区用品独立
4.2实验室设计原则
4.2.1为了加强实验室密封性，防止空气对流，实验室隔断材首选塑钢。
4.2.2如实验室要吊顶，进出风管道要走于吊顶上部，经专用通道进出。
4.2.3吊顶顶部安装紫外消毒灯和照明灯（包括缓冲间），电源开关设在缓冲间。
4.2.4实验室装修前应先将生物安全柜装进实验室。
5.临床基因扩增检验实验室技术验收表
注：请在验收所选项打 “√” 。
6.PCR各区设备设施（可根据项目实际情况调整）
6.1试剂储备区（一区）
6.2标本制备区（二区）
6.3 扩增区（三区）
7.PCR实验室日常需用物品
8.PCR实验室质量管理体系
根据实验室的具体情况编写质量体系文件，《质量手册》、《程序文件》、《作业指导书》，并保证管理体系运行有效。
管理体系的特点是应有明确的目的、规范的管理、有效的制约、高效的机制、能自我发展的整体。
建立完善的SOP文件，对完成各项质量活动的方法作出规定，每个SOP都应对一个或一组相互关系的活动进行描述。
每个SOP文件应说明该项质量各环节的输入、转换和输出所需的文件、物资、人员、记录以及它们与有关活动的接口关系。
明确每个环节转换过程中各项因素的要求，即由谁做、做什么、做到什么程序、达到什么要求，如何控制、形成什么记录和报告，以及相应的审批手续。
规定在质量活动中需要注意的例外或特殊情况的纠正措施。SOP应简练、明确和易懂并且工作人员熟练掌握和严格遵守。
9.PCR实验室建设相关的指导文件
《医疗机构管理条例》
《医疗机构临床实验室管理办法》
《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》
《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》
