病毒滴度测定中细胞计数方法详解

测定慢病毒滴度的一种常见方法是使用表达荧光蛋白（如GFP或RFP）的病毒，并通过流式细胞术或荧光显微镜计算感染细胞的荧光比例。

以下是一个简化的计算步骤：准备细胞：将目标细胞接种在适当的培养皿或板中，并培养至约70-80%汇合度。病毒感染：将已知滴度的慢病毒与细胞共同孵育，通常使用多种稀释度（如1:10, 1:100, 1:1000）以便于确定最佳感染条件。每种稀释度设置多个重复实验。孵育和培养：感染后培养细胞24-72小时，以确保荧光蛋白有足够时间表达。荧光检测：使用流式细胞仪或荧光显微镜检测细胞中的荧光信号。

计算荧光比例：流式细胞术：将细胞通过流式细胞仪，测定荧光阳性细胞的百分比。荧光显微镜：随机拍摄多个视野，数荧光阳性细胞和总细胞数，计算荧光阳性细胞的比例。

以下是具体的计算步骤：

使用流式细胞术    收集数据：记录每个样本中荧光阳性细胞的百分比。例如，在1:100稀释度下，有20%的细胞是荧光阳性。计算病毒滴度：假设你使用了1 mL的病毒溶液感染了10^5个细胞，并得到了20%的阳性率。计算公式为：病毒滴度 (TU/mL)=荧光阳性细胞百分比×总细胞数/感染体积（mL）例如：病毒滴度(TU/mL)=20%×10^5=2×10^4

使用荧光显微镜拍摄和计数：在多个视野中数荧光阳性细胞和总细胞数。例如，在10个视野中，你数到了100个荧光阳性细胞和500个总细胞数。计算荧光比例：荧光比例=荧光阳性细胞数/总细胞数×100%荧光比例

例如：荧光比例=100/500×100%=20%

然后使用相同的滴度计算公式：病毒滴度 (TU/mL)=20%×总细胞数/感染体积（mL）