聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reactio
PCR技术的概述
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）简称PCR，是美国科学家Kary B. Mullis1985年发明的一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 Mullis 因此获得了1993年诺贝尔化学奖。
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PCR反应原理
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然半保留复制，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
※ 高温变性Denaturation：模板DNA在94℃高温下变性，双链打开变成单链。
※ 低温退火Annealing（复性）：引物与模板DNA互补区结合
※ 适温延伸Extension：模板DNA-引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，靶序列为模板，按碱基互补配对原则和半保留复制原理，引物沿着5'→3'的方向合成新的DNA链。
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PCR反应体系：
模板（Template）：基因组DNA、质粒DNA、扩增后的DNA、cDNA等
引物（Primers）：PCR反应的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。
Taq酶：耐热性DNA聚合酶
dNTP底物：4种脱氧核苷酸混合物，包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP
PCR缓冲液（buffer）：控制体系的pH和离子强度，为DNA聚合酶提供最佳工作环境**
PCR的基本流程：
引物设计→配制PCR体系→PCR扩增→检测扩增产物→扩增产物回收→检测回收产物
A. PCR引物设计
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B. 配制PCR体系
▲PCR管不同于普通离心管，须热冷循环，导热性较好
▲建立反应体系一般推荐冰上冷启动，即将PCR管放在冰浴上，加入各种成分（最后加入Taq酶）
✔ 实验组
✔ 阴性对照（不加模板DNA，不加Taq酶，用无菌水代替）
※ 所有成分都加好以后，做好标记，离心后点甩混匀
C. PCR扩增
Ⅰ PCR扩增条件优化
- 退火温度和时间
- Mg2＋浓度
- 模板浓度
- dNTP浓度
Ⅱ PCR扩增参数
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D. 检测扩增产物
1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物
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E. 扩增产物回收
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