转基因小鼠鉴定问题一：DNA跑胶问题
2022-06-03 本文已影响0人
小牛学生信
1.条带不均一，呈现锯齿
可能的原因有：
- 1.胶浓度较高，关键是没有混匀就凝固了，导致凝胶在缓冲液里分布不均，你试试用1%的浓度配胶，同时注意摇匀后灌胶；
- 2.电压不稳，导致跑胶过程中条带歪曲，也不用那么高的电压跑的，你试试恒流跑20—30mA，恒压显示一般为50-60V(这个跟电泳槽有关，具体的数据看你的电泳槽说明）（参考：DNA琼脂糖凝胶电泳图，条带W状，怎么回事）。另一篇帖子里，说的是80v-140v（如何选择PCR胶浓度、电泳电压及时间）
改进措施：
- 配胶时候，微波炉加热久一点，
- 充分混匀，高火使其溶解，低火时候使其充分混匀
- 跑胶电压调整成100V
结果展示：
2.跑胶结束后，发现整个胶条变薄
image.png
找了很多原因：
1.桌面不平，换成地上进行配胶
2.换了配胶的架子
3.换了配胶的电泳液
都没有改善，然后就把电泳液换了，然后就好了。
当然，作为对啥事都喜欢刨根问底的我来说，还是想找到这个原因？我就去必应一下，琼脂糖凝胶电泳实验技巧及异常分析，这篇帖子最下面的总结表格还是很nice的。大约的原因就是电泳液用久了，很多人不盖盖子，然后水分挥发厉害（出现这个时候正是换季，开了空调，而电泳槽正对着空调口），我们学生看电泳液不够就补了一点液体，从而导致盐分超标。
遇到电泳诡异事件，把电泳液换一遍，没有条带的问题解决一大半。
参考资料：
