助力科研—细胞凋亡检测试剂盒研究

细胞凋亡（apoptosis）指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。

1965年澳大利亚科学家发现，结扎鼠门静脉后，电镜观察到肝实质组织中有一些散在的死亡细胞，这些细胞的溶酶体并未被破坏，显然不同于细胞坏死。这些细胞体积收缩、染色质凝集，从其周围的组织中脱落并被吞噬，机体无炎症反应。1972年Kerr等三位科学家首次提出了细胞凋亡的概念，宣告了对细胞凋亡的真正探索的开始，在此之前，关于胚胎发育生物学、免疫系统的研究，肝细胞死亡的研究都为这一概念的提出奠定了基础。

细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。

细胞凋亡与程序性死亡

其实从严格的词学意义上来说，细胞程序性死亡（PCD）与细胞凋亡是有很大区别的。细胞程序性死亡的概念是1956年提出的，PCD是个功能性概念，描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。例如蝌蚪变成青蛙，其变态过程中尾部的消失伴随大量细胞死亡，高等哺乳类动物指间蹼的消失、颚融合、视网膜发育以及免疫系统的正常发育都必须有细胞死亡的参与。

这些形形色色的在机体发育过程中出现的细胞死亡有一个共同特征：即散在的、逐个地从正常组织中死亡和消失，机体无炎症反应，而且对整个机体的发育是有利和必须的。因此认为动物发育过程中存在的细胞程序性死亡是一个发育学概念，而细胞凋亡则是一个形态学的概念，描述一件有着一整套形态学特征的与坏死完全不同的细胞死亡形式。但是一般认为凋亡和程序性死亡两个概念可以交互使用，具有同等意义。

细胞凋亡与坏死的区别

虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似，但它们的过程与表现却有很大差别。

坏死（necrosis）：坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞 胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA降解不充分，引起局部严重的炎症反应。

凋亡是细胞对环境的生理性病理性刺激信号，环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程。其细胞及组织的变化与坏死有明显的不同。

Abbkine对于细胞凋亡的研究已经深入到了细胞，蛋白和分子水平：

蛋白质水平的Annexin V系列细胞早期凋亡试剂盒，检测磷脂酰丝氨酸（PS）的外翻：

AbFluor 555 细胞凋亡检测试剂盒，KTA0003

AbFluor 647 细胞凋亡检测试剂盒，KTA0004

细胞水平的

Caspase系列试剂盒，检测凋亡相关蛋白Caspase的表达量，检测中期凋亡：

Caspase-6 活性分析试剂盒 (比色法)，KTA3024

Caspase-8 活性分析试剂盒 (比色法)，KTA3025

Abbkine凋亡研究试剂盒使用FAQ：Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引发的级联反应是细胞凋亡过程的中心环节，其激活主要包括线粒体依赖途径和死亡受体介导的信号转导途径，激活后的下游Caspase，通过切割特异性底物，导致细胞凋亡。

1.做TUNEL凋亡检测，需要抗原修复或者冰冻修复吗？

需要细胞固定，不需要做抗原修复，本类试剂盒标记的是细胞核内的断裂基因，而不是抗原蛋白，因此不需要进行抗原修复。

2.Annexin V-AbFluor™ 488 Apoptosis Detection kit试剂盒，可不可以在染色之后，等到60分钟左右再去做下一步呢?

因为这个凋亡实验是活染，细胞先染完第一种染料，如果间隔时间太长，细胞活力就会受影响。

3.Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit (JC-1)试剂盒，能用分光光度计检测吗？

不建议用，该试剂盒是基于线粒体跨膜电位的变化，运用JC-1进行细胞染色，区分健康和凋亡细胞，建议用流式细胞仪或者荧光显微镜进行检测。

4.检测Caspase，组织样本是400-500个细胞，该样本量是否足够？

本试剂盒需要组织的量大概是5 - 20 mg。