琼脂糖凝胶电泳总结(Agarose Gel )
2020-06-21 本文已影响0人
Han_zh
琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为介质,对大小不同的DNA或RNA实现分离的一种电泳方法,是分离、纯化、鉴定DNA片段的常用方法。
DNA琼脂糖凝胶电泳的原理是DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。DNA分子在电场中通过介质而泳动,除电荷效应外,凝胶介质还有分子筛效应,与分子大小及构象有关。
核酸是一种两性分子,pH 8.0时带负电;线性DNA分子迁移率与其所含碱基对数目的对数值成反比。
一、琼脂糖凝胶电泳的过程
- 制胶
-
1%胶浓度(1g琼脂糖+100mlTAE缓冲液)
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电泳缓冲液(50×TAE,工作浓度1×TAE)
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溶胶(煮沸)
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加核酸染料GoldView(5μL/100mL)
- 制胶板
胶板大小、样品孔大小、胶厚度 - 制样
DNA样品和1/6总体积的上样缓冲液6×loading buffer(SDS1%,Glycerol50%,Bromophenol Blue 0.05%)混合
含有溴酚蓝,使样品带颜色,起指示作用
增加样品密度,使样品沉入胶孔 - 上样
记住上样顺序和上样量 - 电泳
100V,24min -
检测(荧光染料需要在激发光照射下才能发射荧光)
凝胶成像系统拍照观察
图片来自天根官网.png
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