年货上线 | GC-MS靶向代谢组学定量方法及方法学验证

前言

临近年底，鹿明生物给您送“年货”了，这次带来的年货是基于GC-MS靶向代谢组学定量方法及方法学验证干货。

GC-MS（气质联用）相关介绍

首先，让我们来了解下GC-MS的相关介绍~

GC-MS分离检测的原理：利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等理化性质的不同来进行分离，然后进入质谱检测器进行检测的过程。

GC-MS仪器分为三个系统：进样系统；分离系统；检测系统。

GC-MS的适用范围：主要取决于化合物的性能，一般适用于分子量小、易挥发的代谢物，详情如下图:

GC-MS靶向定量方法流程

接下来，我们通过如下图片来看一下GC-MS靶向定量方法基本流程：

那我们再来了解靶向定量方法流程重点介绍；首先，我们来看看代谢物提取的一些注意事项：

除了代谢物的提取，代谢物的纯化与富集也是非常重要的；那么纯化和富集的目的是什么呢?纯化主要是为了去除蛋白质、核酸、盐或者干扰目标代谢物检测的其他代谢物；富集的目的主要是提高待测物质的灵敏度和检测限。具体步骤我们也通过下面的图片了解一下：

再来看下建GC-MS方法中非常关键的一个点：衍生化

定量方法

接下来，再看下代谢物定量方法；定量方法主要分2种：外标法和内标法，其中外标法是比较常用的定量方法。

外标法（常用）：用待测组分的标准品作对照物质，将对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法，也称为标准曲线法，是一种绝对定量的方法。

内标法：是一种间接或相对的校准方法，在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质，以校准和消除由于操作条件、仪器波动对分析结果产生的影响，可提高分析结果的准确度。

内标物的选择：

01.理化性质与待测物相近

02.在样品中不存在且不与样品中组分发生化学反应

03.不与仪器设备（色谱柱）发生反应

04.目标物的同位素标记物是最常用的内标物质

05.外源类似物

方法学验证

方法学验证是对测定方法的评价,是建立新方法的研究内容和依据；主要给大家介绍4点：灵敏度、精密度、准确度、线性

灵敏度

灵敏度：包括检出限和定量限

01.检出限（The Limit of Detection，LOD）:指检测方法在规定的实验条件下能检出分析物的最低浓度（信噪比s/n≥3）；

02.定量限（The Limit of Quantitation，LOQ）:指检测方法在规定的实验条件下能定量分析物的最低浓度（信噪比s/n≥10）；

准确度

准确度：实际值与计量值之间的偏差，可以用加标回收率表示。

01.准确度=（测量值/真实值）×100%;

02.加标浓度(4个加标浓度水平):定量下限加标,低浓度加标,中浓度加标,高浓度加标，每一浓度5个测试样；

03.要求准确度偏差在±15%以内，定量下限在±20%内；

精密度

精密度是指同一均匀样品在相同条件，N次重复测定结果彼此符合的程度。它们越接近就越精密，常用RSD表示精密度。

精密度：考察仪器方法和稳定性和重现性，包括日内精密度和日间精密度。

线性

线性：在外标法绘制标准曲线时需要考察线性相关性。

01.线性相关系数大于0.995。

02.通常校正标样需要5-7个有效点，且准确度需要满足80%-120%。

最后，小鹿给大家总结下本篇内容：本次干货主要分享的是如何建立基于GCMS靶向代谢组学方法。有更多不同观点，欢迎留言交流讨论哦~

PS：关于这个主题内容的分享，我们专门制作了视频资料哦，没太听懂的童鞋们欢迎关注私聊索要本节干货视频哦，一键掌握如何建靶向代谢组学方法哦~