文献阅读：唑来膦酸钠促进了癌症患者功能性γδ T细胞的大规模体外
题目：
Zoledronate facilitates large-scale ex vivo expansion of functional γδT cells from cancer patients for use in adoptive immunotherapy
背景
唑来膦酸是一种特异性地作用于骨的二磷酸化合物，它能抑制因破骨活性增加而导致的骨吸收。二磷酸化合物对骨组织选择性作用依赖于其对矿化骨的高亲和性。作用的分子机理还不清楚。长期动物研究表明，唑来膦酸可抑制骨吸收，但对骨的形成、骨的矿化及力学特性没有不良影响。
人γδT细胞可被磷酸化抗原和氨基二膦酸盐(如唑来膦酸)激活。由于γδ T细胞可以不受主要组织相容性复合体(MHC)限制的方式杀伤肿瘤细胞，活化的γδ T细胞过继转移可能代表了一种新的肿瘤免疫治疗方法。我们检测了来自晚期癌症患者的γδ T细胞是否可以被唑来膦酸扩增。
目的：
我们测试了晚期癌症患者的γδT细胞是否可以被唑来膦酸盐扩增。
内容：
健康供者和晚期非小细胞肺癌、骨转移性乳腺癌或前列腺癌、肺转移性结直肠癌患者的外周血单个核细胞用唑来膦酸(5 mM)和白细胞介素(IL)-2 (1000 IU/mL)刺激14天。比较健康供者和肿瘤患者扩增后的γδ t细胞群的表型和功能
结论与收获
1.唑来膦酸能有效扩增健康供体PBMC γδ T 细胞
来自癌症患者和健康供者的gd T细胞对唑来膦酸的反应在表型和功能方面相同。γδ T细胞在体外生长迅速，随着时间的推移，效应分子如干扰素(IFN)-g、肿瘤坏死因子(TNF)-a、穿孔素、颗粒酶B、FasL和TRAIL的表达增加。细胞毒性在第12-14天达到峰值,能增殖持续14天。从最开始的45-70ml外周血中，最终可以得到1*10 的9次方的γδT细胞。
使用已广泛应用于临床的药物唑来膦酸盐，我们已经确定了癌症患者γδ T细胞的高效大规模体外扩增是可能的。这些细胞具有很强的细胞毒性，可用于癌症的自体细胞免疫治疗。唑来膦酸盐扩增的γδT细胞表达Vγ9Vδ2 TCR , 是CD4 -CD8-(80%)或CD4 -CD8+(20%) 。γδ T细胞还表现了NKG2D的上调和活化标志物CD69的表达。
新鲜外周血中主要是CD45RA -CD27+记忆表型或者CD45RA +CD27+naiveT细胞 的表型。相反，来自健康供者或癌症患者的大多数γδ t细胞在唑来膦酸刺激和IL-2培养后具有CD45RA -CD27-的效应记忆表型。这些结果与先前报道唑来膦酸盐能有效刺激和扩增PBMC中的γδ T细胞一致
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2.唑来膦酸钠刺激gd的有效扩增 γδ T细胞，但不是αβ T细胞和自然杀伤细胞
高剂量 IL-2 (1000 IU/ml）下， CD3 + Vγ9 + T细胞培养十天达到95.2%。（4A）
有趣的是，培养第10天，32.2%的细胞表达CD56+CD3+表明γδ T细胞也表达CD56 。 αβT细胞(CD3 +TCR αβ+)和NK细胞(CD3 -Cd56 +)分别从43.6%和11.2%下降到2%和4.7% (图4A)。
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3.唑来膦酸盐激活γδ T细胞的细胞毒活性
健康供体的γδ T细胞对Daudi细胞具有较高的细胞毒性。我们还使用Terascan VPC测试了γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的细胞毒活性。如表5所总结，γδ T细胞确实杀死了这些肿瘤细胞。与以前的报道一致，唑来膦酸预处理肿瘤细胞增加了它们对γδ t细胞介导的细胞毒性的敏感性。
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4.体外扩增γδ T细胞的细胞毒活性动力学
尽管细胞数量持续增加，但细胞毒性在第12天达到峰值，第14天略有下降，为48.7913.5%。综上所述，这些结果提示γδ T细胞在培养第12-14天最适合重新输入患者体内进行免疫治疗。
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唑来膦酸在癌症患者体内进行γδ T细胞的大规模体外扩增用于过继免疫治疗
为了产生足够的γδ T细胞用于过继转移治疗，我们研究了扩大培养是否产生相同的结果。根据细胞生长的程度而需要的烧瓶或培养袋。γδt细胞扩增的效率与上述小规模培养相当。这一数量被认为足以用于过继性γδ T细胞免疫治疗
讨论与评价
使用癌症疫苗刺激细胞毒性t淋巴细胞(CTL)的成功免疫治疗需要确定患者的HLA类型，并确认肿瘤表达了肿瘤相关抗原。然而，肿瘤细胞通常通过下调MHCⅰ类分子或肿瘤相关抗原来逃避免疫系统。因此，基于γδ T细胞的免疫疗法的一个优势是，当MHC I类分子和肿瘤相关抗原的表达不明确，甚至当它们缺乏时，它仍然是可行的，因为gd T细胞以MHC不受限制的方式识别非抗原肽。除了tcr依赖的独特Ag识别外，这些细胞也通过其NKG2D受体以TCR非依赖的方式识别应激诱导的分子，如MICA/B。因此，基于γδ T细胞免疫疗法在癌症患者中具有广泛的应用潜力。
它的不足就是一些癌症细胞的γδ T细胞没有有效的扩增，并且他得到的γδ T细胞只是进行了细胞系杀肿瘤，没有进行动物实验。
