裸鼠皮下成瘤实验技巧

1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中的血清。

3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^{6个细胞/支，接种体积为0.1ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10}7个细胞/ml。

4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。

5、选择的裸鼠一般在5-8周龄，体重18-20g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部。

6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率。

7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴。

裸鼠皮下成瘤实验技巧

9、接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。

10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一般不要超过1000mm3 ，肿瘤负荷过大常常会以违背动物伦理而被杂志社刁难(因为这个问题悲惨地被plos one拒过稿）。

11、肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2ab2 (a为长轴，b为短轴)。

12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。