基因敲除后基因型的验证之单克隆制备与测序

胚胎进行CRISPR/Cas9敲除之后需要对突变体进行基因型的鉴定。
大致如下：
首先，提取突变体的DNA；
再进行PCR得到sgRNA区间的条带，并观察是否有引物二聚体或条带单一；
随后将PCR产物连接载体质粒；
再将连接好的产物转入感受态细胞大肠杆菌；
摇床培养后进行涂板/划平板；
挑单克隆菌株；
做PCR；
再进行测序；