激光共聚焦简明教程
2021-11-03 本文已影响0人
谢俊飞
激光共聚焦简明教程:
- 按照操作规范,依次开启PC Microscope(显微镜) 、Scanner Power ( 扫描电源) 、Laser Power( 激光电源) 以及Laser Emission( 激光开关) 。
- 启动LAS X 软件
- 在Configuration里面打开实验所需的激光;
- 根据不同的染色,选择SEQ序列扫描,并添加不同的通道;例如用了DAPI、FAM、cy3标记的脂肪体样本。因为不同染料对应的激发和吸收波长不同,而检测器上面设置波段的滑块是固定在检测器上的,所以必须注意的一点就是,按照波长顺序进行不同检测器上面的设置。
DAPI的最大激发波长为340nm,最大发射波长为488nm;
FAM (羧基荧光素)激发波长 492 nm,发射波长 518nm;
cy3的最大激发波长为512nm,最大发射波长为570nm。
根据上面波段特性,我们设置了SEQ1设置为DAPI,SEQ2设置为FAM,SEQ3设置为cy3,
图片.png
在不同 SEQ序列上进行详细的参数设置,包括开启激光,波段滑块设置,Gain值等等,这是进行图像呈现的关键之关键。
由于HyD检测器较昂贵,一般PMT即可满足大部分实验需求,所以平台规定操作HyD需联系平台,所以切忌不要开启hyD检测器.