Biotium产品EvaGreen染料GelRed核酸凝胶染料(

2018-07-26  本文已影响0人  shclbio

GelRed 和GelGreen是设计以取代剧毒的代替高毒性的溴化乙锭(EtBr)的新一代核酸凝胶荧光染料。Biotium科学家研发的GelRed 和GelGreen集低毒性、高灵敏性和出色的稳定性等优点于一体,效果由于EtBr及其他EtBr替代品。

几十年来,EtBr因极其低廉的价格,一般的灵敏度,一直被用作核酸凝胶染色的主要染料。然而EtBr是一个高度诱变的物质。该染料的使用安全隐患,净化及废物处置的相关费用等,终导致其代价高昂。正因如此,近年来市场上出现了一些替代品,如SYBR系列染料等。尽管这些替代染料减少了致突变性,但却丧失了染料其他方面的功能。例如,SYBR Safe的灵敏度很低,SYBR Green及SYBR Gold的稳定性远远低于EtBr。SYBR染料能快速的进入细胞,结合线粒体及细胞核DNA,是的染料在一定浓度是有毒的。事实上,在紫外线或其他诱变剂诱导下,SYBR Green I 强烈的突变性已经被广泛认知。(Ohta,et al.Mut Res 492,91(2001))

为了保证GelRed和GelGreen的安全性,Biotium的科学家采用一种新型非常简单的概念:阻止染料进入活细胞减少遗传毒性。我们相信,不给DNA结合染料渗透活细胞中结合基因组DNA的机会,便可以保证染料没有或大幅度减少其诱变性作用。因此,我们设计的GelRed和GelGreen 染料拥有独特化学结构保证其无法渗透细胞膜。Ames试验验证即使浓度远远高于实验者操作凝胶染色的工作浓度,GelRed和GelGreen也无诱变性。此外,环境的安全性试验表示,GelRed和GelGreen是完全无害的,对水生生物无毒。因此,废弃的GelRed和GelGreen可以直接倒入下水道,或按照普通垃圾处理。

无论是作为预制凝胶染料染色或电泳后染色,GelRed和GelGreen染料都是搞灵敏度的。312/302nm的紫外光透射下,GelRed灵敏度远远超过EtBr,与SYBR Gold灵敏度相当,后凝胶染色法GelRed效果更明亮。与SYBR Gold不同的是,GelRed 也可以被作高度灵敏的与之惊叫预制凝胶染色。GelGreen是用于488nm激光凝胶扫描仪或者可见蓝光激发的Dark Reader 的研究人员使用要求。GelGreen光谱类似于SYBR Safe,但比后者更为灵敏。

GelRed和GelGreen另一个主要优势是其显著的稳定性。可以用操作EtBr同样的方式操作两种染料。这意味着,染料在水中是非常稳定的,可以在室温下长期储存,也可以在微波中加热进行预制凝胶。这两种燃料也非常耐光,暴露在室内灯光下也比较稳定。

图1. GelRed 和GelGreen比EB和SYBR Safe更灵敏。左图:比较了GelRed 和EB 的1%预制胶,TBE缓冲液跑胶。右图:比较了GelGreen和SYBR Safe 1%琼脂糖凝胶的后染状况,同样在TBE缓冲液中完成。选用了Invitrogen的1 Kb的DNA Ladder作2倍稀释,分别加入四个泳道中,从左向右依次为200ng,100ng,50ng和25ng。

图2. 在37°C下,分别使用1X SYBR Green I, SYBR Safe, GelRed and GelGreen 对HeLa 细胞进行孵化,并分别在5分钟(A)和30分钟(B)后观察。实验显示SYBR染料迅速进入细胞并将细胞内的核酸染成亮绿色(以上仅图示 SYBR Green 1),而 GelRed 和 GelGreen 则因为不能穿透细胞膜而完全没有进入细胞内, 足以证明GelRed和GelGreen是安全的。

图3. GelGreen (绿色) GelRed (红色)在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱。

图4. 室温下, GelRed ( 500 nm )和 SYBR Gold ( 488 nm )稀释在 1 × TBE 凝胶染色液中测得的吸光度随时间变化图。 GelRed 和 SYBR Gold 初始的吸光度值分别为 0.029 和 0.051 。

GelRed 和GelGreen特点:

比EtBr安全:

艾姆斯氏实验以及其他实验证实无诱变性无细胞毒性;

方便处理:

通过了环境安全实验,可以直接丢弃无需特殊处理。

超高的灵敏度:

比EtBr和SYBR Safe更灵敏。

极高的稳定性:

溶于水中,室温下能长期保存,微波炉加热性能稳定。

广泛的适用性:

适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色。

简单的步骤:

预制凝胶和凝胶电泳后染色。

兼容标准紫外凝胶成像系统及可见光激发的凝胶观察装置:

使用312nm激发的UV凝胶成像系统时,GelRed可以替代EB;无需改变成像条件;GelRed 可用EB常用仪器观察;GelGreen可用SYBR染料仪器进行观察。GelRed 可以替代 EB ; GelGreen 足以替代任意一种 SYBR 染料。

可用于下游实验:

普通的胶回收后,可用于下游实验。

产品信息:

Cat#Product NameUnit Size品 牌

41001GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain, 3X in water4.0 LBiotium

41002GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO0.5 mLBiotium

41003GelRedTM Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in water0.5 mLBiotium

41003-1GelRedTM 10,000X solution in water, bulk pack10 mLBiotium

41004GelGreenTM Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO0.5 mLBiotium

41005GelGreenTM Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in water0.5mLBiotium

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