琼脂糖凝胶电泳
2024-03-14 本文已影响0人
expgene
探序基因肿瘤研究院 整理
A. 配置琼脂糖凝胶。（以制作小胶，30ul为例）
1、制胶(1%)：将加入30ml 1×TAE缓冲液和0.3g琼脂糖的三角瓶在微波炉加热至沸腾，摇匀至无颗粒。也可以用水浴锅加热煮沸，注意要用猛火。
2、倒胶：先插梳子，再倒胶。胶冷却至60℃左右(不烫手)加染料后（胶-GelRed:1ml-1ul或30ml胶+3ulGelRed）缓缓倒入电泳槽 (先胶布封口，放好梳子)，待胶凝固后取出梳子。
B. 配置电泳槽
将1×TAE缓冲液倒入电泳槽中。
C. 加DNA样本到凝胶的小孔上。注意小孔的大小，小孔一般能放10多ul
为了成像清晰，建议DNA样本要10ng以上。5ul的样本溶液混合1ul的loading buffer。具体可参考loading buffer的说明书查看加的量
D. 电泳跑胶
稳压条件下120V电泳，待溴酚蓝移动至接近胶前沿(约1cm)时停止电泳(约25min)。具体电泳时间要自己摸索，应该是要20-40分钟左右。
F. 查看跑胶结果
可使用专门的凝胶成像仪，也可使用便携的蓝光切胶仪。但是如果DNA样本的浓度低，蓝光切胶仪将看不到DNA跑胶的条带。
参考视频：
其他总结：
