scRNA-seq: Microwell-seq
From Guo-Guoji Lab in Zhejiang University.
References :
Construction of a human cell landscape at single-cell level (https://doi.org/10.1038/s41586-020-2157-4)
Mapping the Mouse Cell Atlas by Microwell-Seq (https://doi.org/10.1016/j.cell.2018.05.012)
Deep learning of cross-species single-cell landscapes identifies conserved regulatory programs underlying cell types (https://doi.org/10.1038/s41588-022-01197-7)
1. Microarray fabrication
整体流程:
硅晶片
>PDMS
>琼脂糖
image.png
1.1 硅晶片
硅晶片大小:
20mm
x20mm
微孔大小:直径为
28um
;深度为35um
每张硅晶片上的微孔数量:
100,000
个合成公司:苏州研材微纳科技公司;http://www.rdmicro.com/#/home
1.2 过程说明
image.png
2. Bead synthesis
整体流程:
image.png
2.1 磁力球的尺寸
直径:
20~25um
2.2 合成步骤
第一步:
带有羧基的磁球
与带有氨基的单链DNA
相连;一共96个孔(96孔板),每个孔中的Barcode1
相同,孔与孔之间的Barcode1
不同;把96个孔中的液体混合后再分配到一个新的96孔板的96个空中,用作第二步第二步:加上
Barcode2
;一共96个孔(96孔板),每个孔中的Barcode2
相同,孔与孔之间的Barcode2
不同;把96个孔中的液体混合后再分配到一个新的96孔板的96个空中,用作第三步第三步:加上
Barcode2
和UMI
;每个孔中的Barcode3
相同,孔与孔之间的Barcode3
不同,每个Barcode3
对应的UMI
不同结果: 同一个磁力球上的
Barcode1
,Barcode2
和Barcode3
相同,但是UMI
各不相同;不同的磁力球上由Barcode1
,Barcode2
和Barcode3
形成的组合不同合成公司:苏州知益微球科技有限公司;http://www.kbspheres.com/en/wap/index.asp
2.3 过程说明
image.png