2020-02-24 与黑色素瘤PD-L1相关的免疫调节基因的差

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目的-阻断免疫抑制性PD-1 / PD-L1途径在多种癌症类型中均具有抗肿瘤活性，并且PD-L1在肿瘤细胞和浸润性髓样细胞上的表达与反应的可能性相关。 我们先前发现，PDG-L1 +与PD-L1（-）黑色素瘤中的TILs过度表达了IFNG（干扰素-γ），通过促进PD-L1的展示而产生了适应性免疫抵抗。 进行当前的研究以鉴定PD-L1 +黑色素瘤微环境中协同促进免疫抑制的其他因素。
实验设计-用免疫组织化学（IHC）评估存档的福尔马林固定石蜡包埋的黑色素瘤标本在肿瘤细胞表面的PD-L1蛋白表达。 使用全基因组表达分析，定量（q）RT-PCR，免疫组织化学和功能性体外验证研究来评估PD-L1 +与PD-L1（-）黑色素瘤中差异表达的因子。
结果-基于全基因组表达谱的功能注释聚类揭示了PD-L1 +黑色素瘤中上调的途径，涉及免疫细胞激活，炎症以及抗原加工和呈递。 通过qRT-PCR进行的分析表明，PD-L1 +黑色素瘤中功能相关基因的过量表达，涉及CD8 + T细胞活化（CD8A，IFNG，PRF1，CCL5），抗原呈递（CD163，TLR3，CXCL1，LYZ）和免疫抑制[ PDCD1（PD-1），CD274（PD-L1），LAG3，IL10]。 功能研究表明，某些因素（包括IL-10和IL-32-γ）可诱导PD-L1在单核细胞而非肿瘤细胞上的表达。
结论—这些研究阐明了肿瘤微环境中免疫检查点调节的复杂性，确定了可能导致协同免疫抑制的多种因素。 这些因素可能提供抗PD-1 / PD-L1治疗的肿瘤逃逸机制，在组合免疫调节治疗策略中应考虑将它们作为共同靶向。

方法

黑色素瘤标本通过免疫组织化学（IHC）分析

全基因组微阵列分析

多重 qRT-PCR

组织切片中淋巴细胞活化基因3（LAG-3）表达的分析

细胞培养

重组细胞因子和趋化因子

细胞因子和趋化因子对培养的黑色素瘤PD-L1表达的影响

细胞因子和趋化因子对人PBMC（T细胞和单核细胞）PD-1 / PD-L1表达的影响

流式细胞仪分析

结果

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