实时荧光定量PCR国际化标准-MIQE

The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments   实时荧光定量PCR国际化标准-MIQE

1. Nomenclature术语：

1.1 缩写（abbreviation）

qPCR：quantitative real-time实时定量PCR

RT-qPCR: reverse transcription–qPCR逆转录qPCR

RT-PCR: 逆转录PCR

1.2 Genesused for normalizationshould be referred to asreference genes参照基因, not as housekeeping genes.

1.3 TaqManprobes should be referred to as hydrolysis probes(水解探针).

1.4 术语FRET探针(荧光共振能量转移探针)是指一种通用机制，其中发射/淬灭依赖于2种荧光染料分子的电子激发态之间的相互作用。LightCycler型探针应称为双杂交探针。

1.5 TheOxford English Dictionary lists onlyquantification, not quantitation;therefore, the former is the proper word.

1.6 循环数表示：Cq quantification cycle

2. Conceptual Considerations

2.1 Analytical sensitivity分析灵敏度 ：指的是一个样本精确检测的最小拷贝数。灵敏度表示为LOD（the limit of detection），用给定的方法确定（95%概率）可以检测到的浓度。区别于临床灵敏度。

2.2 Analytical specificity分析特异性：指分析样本中有其他非特异性目标存在时，qPCR检测出目标序列的能力。区别于诊断特异性。

2.3 Accuracy准确性：实验测定浓度与实际浓度之间的差异。以 fold changes 或 copy number 表示。

2.4 Repeatability重复性（短期\批内）：同一方法测定同一批样品的精确性和稳定性。它可以表示为cq变异的标准差。用The SD for the Cq variance ；the SD or the CV for copy number or concentration variance表示。

2.5 Reproducibility重现性（长期\批间）：指不同批次或不同实验室产生的结果差异，通常表示为拷贝数或浓度的SD或CV。

出版物在描述目标基因的mRNA浓度时，应该明确目标是什么。剪接模式的存在，仅针对一个或两个外显子的RT-qPCR检测不足以描述特定基因的表达水平。因此，必须提供引物的序列信息，并评估它们与转录本和单核苷酸多态性数据库中记录的已知剪接变异和单核苷酸多态性位点的特异性这可以通过RTprimerDB网站来完成，该网站包含所有相关信息。对于商业分析，产品批次信息和

供应商提供的的证标准都是必须的。强烈反对未经验证的商业检测和仅在计算机中验证的检测结果。

mRNA和蛋白质浓度数据之间并不总是一致的。检测到mRNA存在，并不能说明该mRNA可以被 翻译成一个有功能的蛋白。了解特异的microRNA的存在和功能，对于理解基因表达和量化mRNA种类同样重要。

值得注意的是，大多数qPCR数据是相对的，不是绝对的，参照基因和材料的选择至关重要。评估实验结果的有效性必须考虑相对定量参考的适当性。因此，开发参照DNA和RNA校准材料，虽然很有帮助，但不是万能的。

在RT-qPCR实验中，会由于实验方案的不同或者数据处理算法的不同而导致报告结果的差异，因此需要对报告结果有一个分析和解释。