Localisation of PGK1 determines

本文选自pancreas  ，http:// dx. doi. org/ 10. 1136/gutjnl- 2018- 317163，喜欢的朋友可以自行下载阅读。

我什么习惯来着，来啊来啊说一遍，文章想读好，构图少不了，天天看摘要，肯定提不高。

对于这图，我要挺住！！！

糖酵解酶PGK1被TGF-β/smad4抑制。Smad4的缺失诱导PDAC中PGK1表达上调，从而增强糖酵解和侵袭性肿瘤行为.在SMAD4阴性的PDAC中，核PGK1通过线粒体氧化磷酸化诱导优先驱动细胞转移，而细胞质PGK1作为糖酵解酶优先支持增殖。看到了吧，这里面中心环节还是PGK-1和TGF-b/SMAD4的爱恨情仇。下面正式开始文章的主要内容。

既然SMAD4在胰腺癌中作用这么重要，作者现在人体试验中看看smad阳性与阴性患者对FDG的摄取情况，并定量计算SUVmax,smad突变与FDG摄取情况的变化。

可见smad缺失增加了胰腺肿瘤对FDG的摄取，换句话说就是，smad缺失的患者，胰腺肿瘤对糖的利用增加了。作者进一步看了看胰腺肿瘤细胞系中smad的表达情况，应用糖酵解抑制剂和不加葡萄糖时观察发现，smad突变型细胞更加依赖糖酵解生存。

作者进一步观察了bxpc和cfpac细胞系在不同条件刺激下的产酸、氧耗和葡糖糖消耗、乳酸生成变化。

为了进一步探讨smad突变与胰腺癌代谢重组之间的关系，作者选了8个Smad4阴性的PDAC样品进行液相色谱-质谱代谢组学分析，因为胰腺癌常常合并多种突变，作者也对两组之间突变情况进行了比较，没有统计学差异，Smad4主要负责代谢谱的改变，显示出42种具有统计学意义的差异代谢物。smad阴性样品中3PG升高最明显，作者通过PCR阵列（这个什么鬼）检测了糖酵解基因在过表达Smad4的BxPC-3细胞中的表达，通路分析表明，在Smad4阴性的PDAC细胞中，葡萄糖代谢显著上调，结合多组学数据结果，PGK1，催化合成3PG的糖酵解酶，可能是PDAC中Smad4的目标，结合组织及数据库分析，表明PGK1在smad突变中调控糖代谢重组中的作用。

作者构建了一个含有突变Smad4的载体(Smad4ΔNLS)，该载体可以破坏Smad4移位到细胞核中，并将该载体转染到Smad4阴性细胞中，Smad4ΔNLS不具备代谢重编程能力，TGF-b/smad4wt可以抑制PGK1的表达，而Smad4ΔNLS不能抑制，所以说，是核内的smad4发挥了抑制PGK1表达的作用。

这个图我怎么看不懂什么意思

作者在PGK-1启动子区域有一个smad4的结合原件SBE,突变该结合位点后，PGK-1表达升高。

以上内容说机制也不完全像机制，说表型也不像是表型，不明所以。下来，作者进一步研究了smad4缺乏的时候，PGK1的功能情况。在TCGA数据库中，作者发现，smad4突变组中，PGK1与OS相关。文中居然出现了这样的句子：Moreover, analysis of our cohort data showed that SMAD4-negative PDAC with a low level of PGK1 had lower SUVmax, MTV and TLG levels.又是人类迷惑系类吗？？作者先作了一波功能实验。用了HPDE-Kras的细胞（这里为什么不用肿瘤细胞系了？）总体说明了一个问题，PGK1的沉默主要是通过抑制糖酵解来抑制异种移植瘤的生长，Smad4缺失在PDAC发育和代谢重编程中的作用可能依赖于PGK1

E/F用的是PDX模型

.这就相当于做体内实验了，然后是细胞实验，直接上图，应该都能看明白。无非是PGK1在肿瘤细胞系EMT、增殖、迁移中的作用。

H 是鼠PDX模型的IHC图片

前文作者不是说了亚细胞定位不同，对细胞代谢重组也是有作用的吗，smad4对PDAC的代谢重组依赖PGK1，而核内的SMAD4才是影响PGK1因素，也就是说smad4的亚细胞定位不同，对于肿瘤的代谢重组是有不同意义的。作者使用CRISPR/CAS9基因组编辑敲入技术，在Smad4阴性的PDAC细胞中用PGK1MUT、PGK1NLS和PGK1WT取代内源性PGK1。3-PG是PSK-1的产物。

从上图可以得知，pwpi和pgk1MUT的细胞中，葡萄糖衍生的三羧酸循环代谢物(柠檬酸)显著增加，在pgk1Δnls和pgk1wt的细胞中，糖酵解代谢物(乳酸)显著增加。

然后，作者又作了侵袭相关表型与PGK1的关系，附在了补充文件上。

最后的最后，大家该猜到什么了吗？当然是加上临床数据，在smad4隐性的PDAC 患者中PGK1与预后相关

C：Representative IHC imaging of PGK1, E-cadherin and Ki-67 staining in samples from patients with PDAC. Based on the PGK1 localisation, patients were classified into nuclear PGK1-positive (NP) and PGK1-negative (NN) groups. Based on the intensity of cytoplasmic PGK1, patients were classified into high-level cytoplasmic PGK1 (CH) and low-level cytoplasmic PGK1 (CL) groups.

文章至此结束了，我想说这个文章做的也太乱了吧。我想问问几个问题：1.这个流程图里的转移、凋亡为什么文中都没有，但是为什么还画了出来？2.细胞质和细胞核smad4或PGK1具体有什么作用？文章中似乎也没有看出什么明显的区别，只有smad4只在细胞质中会影响PGK1的表达，我想说这不就是废话吗，smad是转录因子啊，他不去细胞核里，他怎么去转录PGK1，小蝌蚪不去找妈妈怎么会有下一代？还有这个PGK1的细胞质和细胞核定位不同更没有意义了。完全看不出来有什么作用。3.文中的EMT我就想问问这和文章主题有什么关系吗？试问EMT和代谢重组有什么关系吗？4.还有就是最后一张图为什么是个总的P值，在我看来完全没有任何意义可言。5.文章总体叙事逻辑让人感觉丈二和尚摸不着头脑，东一榔头，西一棒槌的，能不能细胞、组织、体内、体外的分开、按顺序来，大道至简，好的论文也应该是专业以内只看图就能明白作者的思路。6.这个TGF-b/SMAD4对PGK1的抑制作用在于这个SBE，组织中可以看到smad1和PGK1表达高低的不同组合，如果smad4对PGK1的抑制作用是不是还有其他机制引起PGK1的改变，也就是说PGK1的改变并不一定是SMAD4依赖性的。个人能力有限，如有不到之处，欢迎批评、指正。