人T淋巴细胞Jurkat细胞培养要点

人白血病 T 淋巴细胞 Jurkat, Clone E6-1 由 Schneider 建立，来源于一 个 14 岁的男孩的外周血。该克隆是 Jurkat-FHCRC 细胞株的一个克隆（Jurkat 的一个衍生株），经佛波酯(phorbol esters)和外源凝集素（lectins）或抗 T3 单克 隆抗体（需要两种物质共同诱导）诱导后可产生大量 IL-2。

Jurkat细胞是一种悬浮细胞，是用于研究急性T细胞白血病，T细胞信号传导以及易感病毒进入的各种趋化因子受体，特别是HIV的表达的永生化人T淋巴细胞系。它在生物学研究上具有十分广泛的应用，比如应用Jurkat细胞研究核糖核酸酶P的M1-RNA，探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。

Jurkat细胞培养注意要点

➊ Jurkat细胞为悬浮生长，理想的状态是均匀的成团生长；

➋ Jurkat细胞有密度依赖性，细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在4 ~8×10^5 /mL为宜；超过1.0 ×10^6 /mL则需要传代。

➌ Jurkat细胞对机械力较敏感。正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。

➍ 血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。

➎ 如生长过程中观察到细胞团中心发黑，代表细胞团过大，这个时候可以轻柔的吹散较大的细胞团，但是不用强行吹散成单个细胞。

Jurkat细胞换液

➊ 补液法：培养基变黄时可补加适量（1~2mL）新鲜培养基，补加1-2次之后，用离心的方式全部换液，离心1200rpm （约250g）3分钟。

➋ 半换液法：以T25瓶子为例，瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间，待细胞沉底，小心吸出2.5mL的培养基，转移到离心管，离心1200rpm （约250g）3分钟，检查有没有沉淀，以免损失细胞；原瓶补充2.5mL新鲜培养基，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶。

➌ 如果换液后第二天培养基就变得很黄，同时镜下检查未污染，说明细胞密度大，应该传代。

Jurkat细胞传代

➊ 摇晃培养瓶，把细胞摇匀，均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量培养基。

➋ 离心法：离心后计数，按照40-50万细胞/mL的密度接种到T25瓶里，瓶中培养基量以5mL为宜。不方便计数时，按1:2比例传代。

➌ 死细胞或细胞碎片较多的情况下，建议用离心法传代，离心转速可适当降低（推荐800~1000rpm或160~200g）。

Jurkat细胞冻存

➊ 由于Jurkat是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万-300万/mL为宜，以提高复苏存活率。

➋ Jurkat细胞对冻存温度比较敏感，建议冻存后立即转入-80℃冰箱，长期保存应放在液氮罐中。

➌ 经测试，Jurkat使用非程序降温冻存液的复苏存活率高于程序降温冻存液，推荐使用HyCyte™一步冻存液（GUCP-R201）。

Jurkat细胞复苏

➊ Jurkat细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作。