"千方百计"测病毒

2019年10月，河北省某养牛场发生腹泻疫情，部分牛出现低烧、食欲减退和轻度呼吸道症状，采集粪便，用MDBK细胞对粪便种病毒进行分离培养，得到病毒HB19-1。通过高通量测序以及进化树分析发现该病毒为BEV毒株，通过动物模型检测它的致病性。

发表期刊：Viruses （ IF：5.048）

发表时间：2021年11月                     

合作单位：南京农业大学兽医学院

样本类型：牛肾细胞

实验方法：RNA病毒测序＆电镜观察＆qRT-PCR＆动物实验＆复制动力学＆组织病理学＆间接免疫荧光实验

主要结论

1. 分离培养得到HB19-1

       采集18份粪便样本，加入缓冲液，离心，过0.22 m孔滤膜，MDBK细胞对滤液进行分离培养，获得HB19-1。

2. HB19-1身份的确定

      通过全基因组测序得到病毒的核酸序列，推测出其氨基酸序列，通过与数据库中其他病毒氨基酸序列对比，确定HB19-1是具有典型细胞病变效应的BEV毒株。在GenBank数据库中BEV株的基因组数据，进行系统发育分析，发现HB19-1与猪肠病毒(PEV)株具有较近的遗传关系。

图   HB19-1毒株的系统发育分析图

3. 动物模型检测其致病性

        HB19-1接种健康3日龄新生ICR小鼠构建动物模型，接种组和对照组均未见明显临床症状。通过RT-qPCR检测HBI9 -1在小鼠体内的表达情况，发现病毒RNA在心脏、肺、肾、脑、肠和肌肉组织中均可检测到，在肺和肌肉组织中含量最高。光镜观察HE染色后的组织切片，其结果与qRT-PCR结果一致。

图  病毒RNA的检测和量化  图  3 d后的组织病理学分析

4. 农场BEV感染的流行病学调查

抽样调查，通过RT-PCR和间接免疫荧光实验（IFA）发现，牛群中普遍存在BEV感染，且腹泻样本中BEV感染的比例高于无症状样本。

小结：本文分离并鉴定出一株引起牛腹泻的BEV病毒—HB19-1株，虽然在动物试验中没有表现出典型的疾病症状，但观察到肺、肠和肌肉组织出现明显的病理损伤，建议对动物的BEV感染进行持续监测，以控制这一潜在危险病毒的传播。

参考文献：

Isolation and Identification of Type F Bovine Enterovirus from Clinical Cattle with Diarrhoea

https://doi.org/10.3390/v13112217