求助

各位老师：我有两个问题求助。拜托

1 我的目的是构建一种含有CDH16-GFP reporter的人成纤维细胞系，即如果细胞表达cdh16这个蛋白，就会出现荧光，CDH16是一种肾脏上皮的特异性蛋白。我通过GeneCopoeia这个网站找到了文献中别人使用的CDH16的一段启动子序列1.5K bp，同时自己也从人肾小管上皮细胞提取的基因组中PCR出了一段5K bp大小的启动子（从ATG上游拉了5000bp，这段中包含了那1.5K bp）。我将这两段启动子替换了plvx慢病毒载体中的CMV启动子，后接GFP，另外该载体中含一个PGK启动子启动嘌呤霉素。我将该质粒包装成慢病毒，转染了人成纤维细胞以及表达CDH16蛋白的人肾癌786-O细胞和293T细胞（后2种想作为阳性对照），然后嘌呤霉素筛选。结果发现我在显微镜下无法观察到三种细胞的GFP，但通过流式FACS检测发现人肾癌786-O和293T细胞的FITC通道表达增高，但不够强，我认为这可能是在荧光显微镜下看不到GFP的原因？同时，我用GFP抗体做免疫荧光染色是阳性的。有的老师认为是由于人的native启动子不够强，不足以是GFP达到可观察的强度。不知道各位老师对此有何看法，是否有解决方法？谢谢 下面为 786-0以及FB细胞流式检测结果

2 还有一个问题：是否可用小鼠的CDH16启动子来替换人的，理论上这样的尝试可以吗？因为小鼠的CDH16promoter在以往研究中可以通过显微镜观察到荧光。