Strep-tag 蛋白纯化

链亲和素（Streptavidin, 亦称链霉亲和素)

是从细菌亲和素链霉菌中纯化出的一种60kDa的蛋白质。链亲和素同源四聚体对生物素（即维生素B7）具有极高的亲和力。生物素与链亲和素的结合是已知自然界中最强的非共价相互作用之一，其解离常数（Kd）大约是10−14 mol/L[1]。因为链亲和素-生物素复合物对有机溶剂、变性剂（如盐酸胍）、洗涤剂（如SDS与曲拉通）、蛋白水解酶类及极端温度和pH具有良好耐受力，故链亲和素被广泛用于分子生物学与生物纳米技术中。Streptomyces adidiniil中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。Avidin的pI=～10.5，在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。

生物素（Biotin）

为维生素B群之一，又称维生素H、维生素B7、辅酶R（Coenzyme R）等。 生物素在肝、肾、酵母、牛乳中含量较多，是生物体固定二氧化碳的重要因素。容易同鸡蛋白中的一种蛋白质卵白素（Avidin）结合，大量食用生蛋白可阻碍生物素的吸收导致生物素缺乏，如脱毛、体重减轻、皮炎等。由于其缺乏症极少发生，一般也常直接称之为生物素。

单体链亲和素（条带图），结合着生物素（球状）

生物素在脂肪合成、糖异生、天冬氨酸等生化反应途径中扮演重要角色。

用生物素抗体检测低丰度蛋白质

生物素与抗生物素蛋白或者链霉抗生物素蛋白形成大型复合物用于信号放大。了解使用生物素二抗的不同方法。

生物素

生物素是一种天然存在，在许多生物过程中具有重要作用的维生素。 生物素与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白之间存在强烈的亲和力。 抗生物素蛋白是一种在鸟类，爬行动物和两栖动物的某些组织中发现的糖蛋白，而链霉抗生物素蛋白是从链霉菌（Streptomyces avidinii）中分离的。这两个蛋白都可以通过和四个生物素分子结合形成一个大的复合物。因此，生物素与抗体和报告酶或荧光团的偶联提供了扩增信号的有力手段。 这些特征使得基于生物素化抗体的方法成为检测低丰度蛋白质的理想选择。

生物素化抗体的两种使用方法：

• 抗生物素蛋白**** - 生物素复合物（ABC）方法：报告酶连接的大型抗生物素蛋白 - 生物素复合物与生物素化抗体一起孵育。 由于酶与抗体比率高，信号被放大。
• 标记的链霉抗生物素蛋白**** - 生物素（LSAB）****方法：将生物素化的抗体与由链霉抗生物素蛋白 - 报告酶复合物孵育来扩增信号。 LSAB方法中的复合体小于ABC方法中的复合体
  strep-tag蛋白纯化的发展历史：http://www.bio-city.net/index.php/Technology/index/am_id/4226/id/4237

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