肾缺血再灌注损伤模型 构建

参考文献：2011年 BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立与评价

实验方法:

应用微型动脉夹夹闭双侧肾蒂方法制备BALB/c小鼠IRI模型，取得较为满意的效果，并观察了不同的肾脏缺血时间对肾IRI的影响。

动物分组

31只小鼠根据肾缺血时间不同随机分为:0 min组对照组(n=4)、30 min(n=8)、35 min(n=8)和45 min(n=11)3个实验组。另取26只小鼠观察肾缺血45 min生存率，随机分为omin对照组(n=4)和45min实验组(n=22)。

手术程序:

小鼠术前8一12h禁食，应用二澳乙醇溶液(200 mg/kg)经腹腔内注射麻醉。实验组:沿腹正中线做1.5一2.0 cm的切口，逐层分离皮肤、腹膜，进入腹腔，将肠道推向一侧，找到肾蒂后用无损伤微型动脉夹迅速阻断左右肾蒂，可见肾脏由鲜红变紫黑色，表示夹闭成功，按分组不同持续夹闭肾蒂不同的时间，去除动脉夹，恢复血流灌注，可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红，恢复原来颜色，术毕分层缝合关闭腹腔。术后小鼠于24一29℃的环境保暖，补充水与饲料。术中应用生理盐水使小鼠保持充分的水化。对照组:同法打开腹腔并找到肾蒂，但不夹闭’肾蒂。

模型成功与否判定:

造模成功:术中夹闭双侧肾蒂后，可见肾脏由鲜红变紫黑色，去除动脉夹，恢复血流灌注，可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红，恢复原来颜色;并且术后1~3h，可见小鼠苏醒，逐渐恢复正常活动。造模不成功:肾脏恢复血流后5 min，’肾脏未恢复正常颜色;或术中损伤周围组织或器官;或术后1~3h，小鼠未苏醒或死亡。

根据本实验结果，作者认为应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法可制备稳定肾IRI模型，雄性小鼠肾缺血35~45 min是造模较为理想的肾缺血时间，所得模型效果满意。

人脐带间质干细胞通过巨噬细胞参与修复肾缺血再灌注损伤研究

实验方法

• 选用雄性C57BL/6品系小鼠，于术前饲养于本课题组1周以上，正常进食及饮水。
  小鼠按4.0 ml/kg的剂量腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉后，以俯卧位固定于手术板上。小鼠背部脊柱两侧肾区备皮，酒精消毒后，平行脊柱剪开约1 cm大小的切口。暴露肾脏并钝性分离肾蒂后，以无损伤微动脉夹夹闭双侧肾蒂达30 min。若肾脏由鲜红色转变为紫黑色，表示缺血成功。期间，小鼠被置于37℃恒温毯上以维持体温恒定，且手术切口处覆盖温生理盐水浸润的纱布以防止肾组织脱水。30 min后松开动脉夹，可见整个肾脏在1 min内由紫黑色逐渐转变为鲜红色，表示血流再灌注成功。最后，将双侧肾脏归位，并缝合伤口。
• 假手术组小鼠除了不夹闭肾蒂以外，其余手术操作均与损伤组一致。小鼠具体分组为:假手术组、PBS对照组、HFLI细胞对照组以及hucMSCs细胞治疗组，每组5只。