Western-Blot 常见问题与经验（二）

1.当目的蛋白质分子量很小（10KD）时western blot的方法？

经验：缩短转移的时间，使用0.2μm的膜或者两层膜叠加再进行转膜。

2.蛋白只停留在胶上，转移不到膜上是怎么回事？

经验：转移时间过短；样本浓度过低。

3.为什么︶ 条带呈笑脸状？

经验：电泳系统温度偏高、凝胶不均匀冷却，中间冷却不好。

4.为什么︵ 条带呈皱眉状

经验：凝胶或玻璃挡板底部有气泡、两边聚合不完全。

5.多少细胞提的蛋白够做western blot？

经验：通常在5×106就可以。

6.如果上样量超载，要用什么方法来增加上样量？

经验：超载30％是不会有问题、通过对样本进行浓缩，或者透析掉一部分小分子蛋白。还有可以考虑加大胶的厚度，使用1.5mm的。