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【ATAC-Seq 实战】一、分析流程

2022-12-27  本文已影响0人  佳奥

这里是佳奥!我们又开始了新的分析流程学习。

与ChIP-Seq相似,ATAC-Seq也是通过染色质片段来进行表观相关的分析。

我们先来看一下分析流程吧。

1 数据分析概述

1.1 原始数据质控

Trim galore

去除线粒体、PCR重复。

1.2 ATAC-Seq数据质量评估

ChIPQC:一个R包,可以给出多个质量评估度量值

IDR: 样本内的重复性检测,合并一致性peaks

1.3 注意基因组的黑名单(重复序列,微卫星序列)

1.4 call peaks注意

ATAC-Seq关心的是在哪切断,断点才是peak的中心,所以使用shift模型,--shift -75或-100

1.5 peaks相关

DiffBind:一个R包,基于DESeq2、edgeR方法鉴定样本间的差异peak

注释:Y叔的ChIPseeker 包

motif分析:Homer,Meme等在线工具

2 分析流程软件

sra-tools
fastqc,multiqc,trim_galore

参考基因组及注释文件: https://www.encodeproject.org/references/ENCSR425FOI/

bowtie,bowtie2,bwa,注意参数
MACS2,注意参数

可重复性统计指标https://www.encodeproject.org/atac-seq/

deeptools
meme/homer motif
annotation(R包,ChlPpeakAnno, ChIPseeker)

下一篇我们开始复现文章数据的实战学习。

我们下一篇再见!

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