小鼠成肌细胞(C2C12)培养注意要点

C2C12细胞株是YaffeD,SaxelO建立的小鼠成肌细胞系的亚株。该细胞分化较快，可形成能收缩的微管，产生特异的肌肉蛋白。在骨形态形成蛋白（BMP-2）的作用下，该细胞可由成肌细胞分化为成骨细胞。检测发现该细胞鼠痘病毒阴性。

小鼠成肌细胞C2C12经过成肌管分化能力验证

细胞名称：小鼠成肌细胞(经成肌管分化能力验证)

细胞简称：C2C12

产品货号：TCM-C720

细胞形态：成肌细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

配套培养基货号：TCM-G720

传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

传代周期：48-72 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

C2C12细胞培养注意要点

1. 细胞贴壁较弱

该细胞贴壁比较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间。另外，在遇到运输震荡、低温、室温静置太长时间、添加的培养基或其他试剂过冷等情况时会出现明显的细胞回缩变粗变短甚至脱落的现象，及时放回培养箱静置培养后可恢复正常。 

2. 注意控制细胞密度

密度过高和过低都会影响细胞状态。密度过低时，细胞生长速度减慢；长满后长时间高密度培养将导致细胞受损，可能影响后续实验。建议细胞生长至80%密度时立即传代。

3. 细胞生长较快

注意每天观察细胞密度和培养基颜色，及时换液或传代。应注意每天传代对细胞不利，通过控制接种密度将传代频率保持在2天左右传一次为宜。

4. 培养时背景中可能有黑点

背景中存在少量黑点，为细胞代谢产物和细胞碎片，不影响细胞生长。若碎片较多可以通过PBS润洗或换液清除。

5. 细胞复苏要点

溶解细胞过程要迅速；已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久，需要尽快离心去除DMSO。

6. 其他注意事项

（1）在培养过程中，保持细胞汇合度30％～90％

（2）每一步操作都要轻柔小心，以免细胞受损

（3）选用优质培养基，减少有害物质对细胞的刺激

C2C12细胞常见问题

1. 为什么会出现空泡？

可能是铺板时铺得不够均匀，局部过于密集，密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多。也可能是血清差，需要更换优质血清，及时换液。

2. 为什么细胞长得慢？

可能是细胞接种得太少，细胞密度太低。可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养。

3. 为什么细胞状态变差，容易漂？

可能是血清问题，建议换血清，并注意血清要程序解冻，不能水浴化开；也有可能是细胞生长密集，需要及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长得过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。

C2C12细胞冻存

1. 待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。

2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。

3. 离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×10^6个/mL。

注意：细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞的状态。如离心后用冻存液重悬计数，请将细胞放置于4℃冰箱内，以减弱细胞代谢，较好的保持细胞状态。

4. 如使用海星一步冻存液，冻存管直接竖直放入-80℃冰箱即可完成“一步”冻存。如使用程序冻存液，需将冻存管放入提前预冷的程序降温盒后放入-80℃冰箱。

注意：细胞冻存时，尽量吹散细胞，注意控制吹打力度。

5. 24小时后可将冻存管转移到液氮进行长期保存。

注意：细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。建议24 h后尽快转移至液氮中。