CAR-T细胞疗法进展（18）

编者按

随着CAR-T细胞疗法的蓬勃发展，每月都会出现新的CAR-T理念和技术。小编尝试把其中一些编录于此，以鼓励我们的患者——抗癌路上，有无数的科学家、医务工作者和我们并肩作战，并且不断取得新的胜利。

乳腺癌的新型CAR-T疗法

在以前的研究中，研究人员生成了针对EGFRvIII突变的CAR-T细胞，为治疗晚期乳腺癌带来了希望。然而，其抗肿瘤效能被认为是有限的，这可能是由于CAR-T细胞无法在肿瘤部位积累足够的数量，或者很快失去活性，无法持续有效地攻击癌细胞。

研究人员注意到，CXCR2可以显著提高CAR-T细胞在体内和体外的迁移和肿瘤特异性积累。CXCLs是一种信号蛋白，在乳腺癌的肿瘤环境中高度表达。当与免疫细胞表面的主要受体CXCR2结合时，它们可以触发细胞内的信号通路，促使免疫细胞向化学因子的来源方向迁移。

研究人员创新性生成了能合成白介素15或白介素18的CXCR2 CAR。白介素15和白介素18都是可以刺激T细胞增殖的细胞因子。通过在CXCR2 CAR中共表达这些因子，可以显著抑制T细胞的耗竭和凋亡。这一发现对于提高CAR-T细胞的生存和功能至关重要。

在随后进行的细胞毒性实验中，这些CAR-T细胞都能特异性溶解EGFRvIII阳性靶细胞。与其它类型的CAR-T细胞相比，它们在攻击癌细胞时产生了更多的颗粒酶B、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α。

在小鼠肿瘤移植模型中，这些CXCR2 CAR显著增强了抗肿瘤效果。小鼠的肿瘤组织中显示了更多的CD8+ T细胞积累，显著改善了小鼠的存活率，并没有引起严重的毒性。研究人员检测到实验小鼠的白介素15和白介素18释放较低，也未在心、肝、脾、肺和肾的组织切片中出现形态异常。

纳米抗体CAR-T增强淋巴瘤治疗效果

T细胞淋巴瘤是一组高度异质的疾病，预后不良，5年总生存率较低，现有的治疗方案效果相对较差。而单靶点CAR-T细胞治疗需要大量和多次输注，也增加了治疗的风险和成本。

近日，研究人员选择CD30和CD5这两个在T细胞淋巴瘤中表达的标记物。然后又成功筛选出针对CD30和CD5的高亲和力纳米抗体，可以精确地与CD30和CD5结合。

借助纳米抗体，科学家们创建了一种新型的CAR-T细胞，能够同时识别CD30和CD5。这就是所谓的双特异性，通过同时针对两个标记物，这些CAR-T细胞可以更精确地识别癌细胞，即使癌细胞改变其中一个，CAR-T细胞仍然可以识别并攻击它们。同时也可以减少CAR-T细胞对正常细胞的攻击。

随后进行的体外实验表明，新型CAR-T细胞对靶细胞的细胞毒性明显高于单靶点CAR-T细胞。

在体内实验中，这些双特异性CAR-T细胞展示了对T细胞淋巴瘤的卓越抗肿瘤能力，相比单一目标的CAR-T细胞效果更好。通过流式细胞术和免疫荧光分析，发现双特异性纳米抗体CAR-T细胞组的肿瘤浸润T细胞显著增加，并分泌更高水平的效应细胞因子。能显著抑制肿瘤生长，延长肿瘤携带小鼠的寿命，达到90天（对照组的小鼠在肿瘤细胞移植后的45天内全部死亡），且未引发潜在毒性或对正常组织的非靶标损伤。

CTLA-4尾部融合增强CAR-T能力

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（简称CTLA-4）是一种免疫检查点分子，对于维持细胞的自我耐受和稳态至关重要。CTLA-4的细胞质尾部（简称CCT）具有高度的内吞作用（细胞通过包裹和吞噬外部物质使其进入细胞的过程），并且不断在细胞表面和细胞内部之间循环，以限制CTLA-4的表面表达。因此，CCT被认为是通过调节CTLA-4的表面可用性来优化T细胞的激活。

研究人员利用CCT设计了一种新型的CAR，通过利用CCT的独特动态特性，并将其与C端CAR融合，改变了CAR分子的动态特性，加速了它们的内吞作用、降解和再循环。这反过来导致了T细胞激活、炎性细胞因子产生、有限的噬细胞作用和癌症抗原丢失的减少，从而减轻了随后的CAR-T细胞自相残杀的可能性。体内外实验均观察到CCT融合有效改善了体内外CAR-T细胞的存活，同时还减少了凋亡。

这种方法有效地增加了CAR-T细胞中T中央记忆T细胞的持续性和比例，从而显著改善了其体内的抗肿瘤效果。

CD19 CAR-T与阿纳白滞素治疗淋巴瘤

CAR-T细胞治疗可能会导致一些严重的副作用，如细胞因子释放综合症（CRS）和免疫效应细胞相关的神经毒性综合症（ICANS）。临床前试验表明，预防性给予阿纳白滞素可消除CAR-T细胞介导的免疫毒性，而不影响效能。据此，研究人员启动了一项2期临床试验，以评估阿纳白滞素在接受针对B细胞淋巴瘤的CD19定向CAR-T细胞治疗的患者中预防严重ICANS方面的效能。

试验的结果确实是积极的。通过在治疗开始时预防性地使用阿纳白滞素，所有级别的ICANS发生率降至19%，而严重的ICANS（≥3级）发生率降至9.7%。与以前的临床试验和现实世界的数据相比，这一降低是显著的，以前的临床试验和现实世界数据报告的所有级别和≥3级的ICANS发生率分别为55-69%和31-38%。此外，阿纳白滞素的使用并未影响CAR-T细胞治疗的效果，患者的总体疾病反应率为77%，完全反应率为65%，这与以前的研究相当。

这项研究还强调了阿纳白滞素剂量和使用时机的重要性。在本研究中，阿纳白滞素是在CAR T细胞输注的第二天或早期CRS发作后开始使用的。剂量从每12小时100毫克开始，并允许迅速增加到每6小时100毫克，以更有效地早期抑制白介素1。这一方案的设计允许根据毒性情况对阿纳白滞素剂量进行风险适应调整，从而在早期更有效地抑制白介素1。

此外，阿纳白滞素的使用还显示了它如何迅速分布到体内并抑制与ICANS相关的其他因子。与其它治疗方法相比，阿纳金拉还具有能够穿越血脑屏障并直接在中枢神经系统内发挥作用的优势。（血清和脑脊液细胞因子在研究中随时间变化）

参考文献：

1、Ruixin S, Yifan L, Chuanlong W, et al. Expressing IL-15/IL-18 and CXCR2 improve infiltration and survival of EGFRvIII-targeting CAR-T cells in breast cancer[J]. Biochemical Pharmacology, 2023, 212: 115536.

2、Xia B, Lin K, Wang X, et al. Nanobody-derived bispecific CAR-T therapy enhances anti-tumor efficacy of T-cell lymphoma treatment[J]. Molecular Therapy-Oncolytics, 2023.

3、Zhou X, Cao H, Fang S Y, et al. CTLA-4 tail fusion enhances CAR-T anti-tumor immunity[J]. bioRxiv, 2023: 2023.03. 14.532655.

4、Park J H, Nath K, Devlin S M, et al. CD19 CAR T-cell therapy and prophylactic anakinra in relapsed or refractory lymphoma: phase 2 trial interim results[J]. Nature Medicine, 2023: 1-8.