工作文档1

注:与对照比较*P<0.05

图3.4D  免疫印迹检测野生型及MT转基因Ang Ⅱ小鼠心肌GRP94腹腔注射1mg/kg Ang Ⅱ 7hrs及24hrs后诱导Ang Ⅱ模型

注：与对照比较，*P<0.05.2.2  血管紧张素Ⅱ诱导心肌MT上调

    免疫印迹结果显示，MT于AngⅡ腹腔注射七小时及24小时后在野生型小鼠心肌中均明显升高，但在MT转基因小鼠心肌中未见上调（见图3.5）。

图3.5  免疫印迹检测野生型及MT转基因Ang Ⅱ小鼠心肌MT腹腔注射1mg/kg Ang Ⅱ 7hrs及24hrs后诱导Ang Ⅱ模型

注：与对照比较，*P<0.05  MT抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡

    免疫印迹结果显示，具有活性的cleaved caspase-3于AngⅡ腹腔注射7小时及24小时后在野生型小鼠心肌中升高，而在MT转基因小鼠心肌中未见改变（图3.6A）。与之相似，ERS相关的凋亡标志物CHOP、具有活性的cleaved caspase-12亦AngⅡ腹腔注射7小时及24小时后在野生型小鼠心肌中上调,但在MT转基因小鼠心肌中未见改变（见图的多余液体，滴加100μl的平衡缓冲液于样本区域上,室温平衡5-10min:

  4)TdT标记:用滤纸小心吸取样本区域周围的多余液体，滴加50μL的TdT酶反应液于样本上；

  5)在反应区域盖上盖玻片以确保反应液分布均匀，于37℃，潮湿环境中反应1h

  6)终止缓冲液

  7)加anti-digoxigenin peroxidase conjugate一份孵育30min

  8)PBS浸洗三次，每次5分钟

  9)显色:

  10)清洗: dH2O 3分钟

  11)复染:甲基绿复染10min,75％，85％，95％，100％的乙醇中脱水，每次2min 

  12)透明封细胞总蛋白质，采用Bradford法进行蛋白定量，80μg蛋白领10％～12％SDS-PAGE电泳1h后，电转（4℃，过夜）至PVDF膜，2％BSA室温封毕3h,先后加入靶蛋白抗体及HRP标记的相应IgG，室温分别孵育1h和0.5h,DBA显色试剂盒进行显色。