基因敲除技术（gene knockout）
2020-03-28 本文已影响0人
Han_zh
随着真菌基因组测序工作进度的不断推进，基因功能正成为真菌研究的重点之一。基因敲除技术，即是可以针对一个 DNA 碱基序列已知但功能未知的基因，通过抑制该基因的表达，分析突变体表型变化后来确定该基因的功能。通常意义上的基因敲除就是利用同源重组技术，将构建完成的基因敲除载体导入到受体细胞中，载体上碱基序列因为和受体细胞内目的基因 DNA 碱基序列同源而重组，将载体 DNA 定向整合到受体细胞基因组上某一个确定的位点处，从而来分析该基因的功能。
一. 基本原理
经典遗传学（Forward genetics）：是从一个突变体的表型出发，研究其基因型，进而找出该基因的编码序列。
现代遗传学（Reverse genetics，反向遗传学）：首先从基因序列出发，推测其表现型，进而推导出该基因的功能。
二. 基因敲除的意义
基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术，通过同源重组原理对目的基因进行替换敲除，是一种直接研究某个基因功能的有效手段。
基因敲除又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定等特点。
Strategy for gene knock-out
- 基因敲除分为完全基因敲除和条件型基因敲除两种。
- 完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动植物个体中的靶基因活性。
- 条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。
Ref：
<基因敲除技术的应用现状与发展前景>
