qRT-PCR设计引物

2022.11.13荧光定量引物设计教程：

1.将自己的目的基因（cDNA）序列粘贴至https://www.genscript.com/tools/real-time-pcr-taqman-primer-design-tool

选取最大的一条（出现非特异性扩增的概率低，序列长度长匹配到的基因更稳）将上游引物及下游引物放入NCBI——Blast

目的：是否为非特异性扩增，尤其是基因家族基因相似度高，出现非特异性扩增的可能性更大，所以放入NCBI——相当于提前做一次电子PCR帮助我们筛选

点击get primer

反应体系：2x Green real time PCR Mastermix 5微升、F和R各0.5微升、cDNA模板：3微升、ddH2O1微升