MTT

MTT溶液：称取100mgMTT粉末加入20mlPBS（高压过的），搅拌30min，使之充分溶解，过滤除菌，分装放-20℃ 避光保存即可。

其他细胞要记得每2天换液！

1. 设计孔板，四周36孔用无菌的PBS填充。第一数列为调零孔，第二数列位对照孔，之后为不同浓度的加药孔。
   四周用200ul PBS铺板
   调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜，不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最后以空白调零）
   对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）
   加药孔（细胞、不同浓度的药物、培养液、MTT、二甲基亚砜）
2. 收集对数期细胞，计数，调整细胞悬液浓度，每孔1000个（对于增殖能力强的细胞；增殖能力低的多放）均匀铺于96孔板中。
   垂直缓慢加入细胞
3. 5%CO2，37℃孵育16~24小时（细胞贴壁后即可）。
4. 铺板后 第二天选择某一固定时间取出一块96孔板，每孔加20ul MTT溶液（之前已经配置好），37°孵箱继续培养4h。
5. 4h后，会看到培养液变成蓝紫色结晶（甲瓒），终止培养，用针管吸去孔内的溶液。（避光！！！！）
6. 每孔再加150ul DMSO，在摇床上低速振荡10min，在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
   上机器：设置 震板---->10min---->MTT 490nm
7. 以后每隔24h取出一块96孔板重复4~6
   测4~5天的