电转染实验常见问题解答（上）

以Entranster-E 电转染试剂为例

一、HepG2细胞的电转染条件是什么？

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时HepG2细胞的电转染条件是：

对于0.2 cm电转杯，细胞密度为5×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为170V， 电容为950μF。

对于0.4 cm电转杯，细胞密度为5×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μl，电压为250V， 电容为950μF。

二、Hela细胞的电转染条件是什么？

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是：

对于0.2 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为130V， 电容为950μF。

对于0.4 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μl，电压为260V， 电容为950μF。

三、BHK-21细胞、Jurkat E6-1细胞的电转染条件是什么？

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时BHK-21或Jurkat E6-1细胞的电转染条件是：

对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为150V， 电容为950μF。

对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μl，电压为280V， 电容为950μF。

四、电穿孔实验时的细胞密度是多少？

进行电穿孔实验时.，需确定每种细胞类型的最佳细胞密度，以使电穿孔效率最大化。对于Entranster-E电转染试剂来说，在含电转试剂的终体系中，电穿孔时的细胞密度一般在1-10×10^6细胞/ml范围内。对于悬浮细胞，最好是接近10×10^6细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞，建议的细胞密度为1-5×10^6细胞/ml。对于0.2

cm和0.4 cm的电转杯，每个电转杯的最终电转染液的体积分别为0.1 ml和0.25 ml。

五、电转染实验时，对于指数衰减形式的脉冲条件是什么？

对于Entranster-E电转染试剂，当使用0.4cm电转杯时，大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2

cm电转杯时，其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm电转杯的电穿孔实验，测试电压范围为200–300

V，电容范围为800-1000μF。首先，将电压常数保持在220 V，从750μF开始，以100μF的增量改变电容。随后，从200

V开始，以10 V的梯度改变电压，同时电容恒定。

六、电转染实验时，对于方波形式的脉冲条件是什么？

一般来说，方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定，即在保持电容不变的情况下，将脉冲长度减半，电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10

V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件，可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。当使用0.4cm电转杯时，大多数细胞类型的一般方波脉冲条件都在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2

cm的电转杯，其范围分别为80-160 V和800-1000μF。脉冲长度从10-20毫秒不等。

七、电转染后细胞孵育时间是多少？

每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染，最佳孵育时间一般为12-48小时，具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。