§新毕设｜8充实、饱饱、高兴的一天

一、今天很充实，主要是自己又熟练和规范了一些实验操作。

1、搞明白了自己之前旧毕设——转基因拟南芥的阳性鉴定。

背景：铜离子转运蛋白copt1～6是一个基因家族，推测其可能存在功能冗余和协同作用。（详细见Yuan Meng的文章）

工作：提取转基因拟南芥的基因组→PCR→电泳→阳性鉴定。

2、摇菌

菌落pcr中用保鲜膜保存的模板，全部加到10mL管（先加4mL加了Kna的LA培养基）中，37℃摇10h。

3、保存菌液

2mL管（橙黄色盖子，西门柜子里有），10%甘油保存，即0.4mL50%甘油（悦姐4℃）+1.6mL菌液；命名格式为“菌落名—载体名—基因名—日期”。

4、测序

擎科生物｜华大基因。以擎科为例，填表（注意填写是否返回样品！），表和样品放袋子，再放冰箱（靠超净工作台）的袋子。

5、电转（冰上操作，迅速）

30微升农杆菌感受态+0.4微升质粒（搅）

→取30微升至电转杯槽

→调4111至1800V红色按钮按下，电转发声

→+600微升无抗LA（吸打混匀）  →  28℃振荡培养2h

→涂板（kana250微升1%，利福平1250微升5%，LA培养基）  →  28℃倒置培养

6、热激（冰上操作）

感受态细胞不同于电转。感受态细胞在-76℃冰箱：电转农杆菌EHA105（28℃）是大圆盒白盖，热激大肠杆菌DH5a（37℃）是瘦小盒子红盖，每离心管是100微升。

热激做的是连接产物K3ein3和K7ein7。涂板的板用的是加了Kna的LA板。

https://www.jianshu.com/p/fe75207b99f2热激步骤

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二、今天很饱，主要是中午跟露姐去校门口蒙阴光棍鸡要了半只鸡，得有三斤沉，整一大盘，吃撑得我晚上没食欲了。

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三、今天也是高兴的一天，因为我又收到了简书官方送的礼物——另外的一本书。

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