实用干货|单细胞组织消化之酶解知多少

作为单细胞测序实验的重要组成部分，高质量单细胞悬液的获得是后续高质量数据产出的前提条件，而不同类型组织有着不同的细胞组成，也具有不同细胞排列方式，这导致在进行组织消化时，不同组织需要摸索不同的实验条件，这就需要使用不同的酶组合配比以及不同的消化时间才能制备出高质量细胞悬液。

人体的不同器官和组织

一、动物细胞的基本特性

1. 相较于植物细胞，动物细胞没有细胞壁，较为脆弱；

2. 动物细胞的体积比微生物细胞大几千倍，稍小于植物细胞的体积；

3. 动物细胞的直径一般在10μm-30μm；

4. 大部分动物细胞在肌体内相互粘连以集群形式存在。

二、样本运输与保存

1. 组织部位选取要明确，尽量切除无关组织，以保证后续实验数据纯度；

2. 组织样本尽量新鲜，最好取样后立即开展组织消化实验；

3. 组织样本如需寄送，需先用PBS或生理盐水将组织冲洗干净，放入组织保存液中，冰袋运输，冰袋加入数量需根据实时天气情况选择，以便使组织始终处于4℃左右的环境中。

三、解离酶的选择

作为单细胞悬液制备常用方法之一，酶解法通过利用特定酶进行相应的化学反应除掉一些特定结构，尤其适合将小块组织消化成为单个细胞（大块组织适合用机械解离方法处理成小块）。作为单细胞组织消化的重要酶种，在单细胞样本制备过程中，胶原酶消化是必不可少的一步。目前商用胶原酶是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等不同类型，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。另外。组织解离常见的消化酶还有胰蛋白酶类、中性蛋白酶、弹性蛋白酶以及一些商业化包装的组合酶，不同酶适用于不同的组织类型。

组织消化中不同酶用途

四、组织消化案例分享

小鼠脾消化结果：

注：FL1表示活细胞荧光标记，FL2表示死细胞荧光标记