【现学现卖】电转染中令人心碎的crack声

疫情宅家期过后，本以为我不能坚持公众号日更了（以为没有大块儿时间看书和文献就没什么写的）。

没想到自从5月份返回实验室，做的实验每个步骤都会有些问题。遇到问题就要分析一下，顺手写了公众号。所以根据我写实验方法这方面的推送频率就可以推断出最近的实验多么坎坷。\捂脸

电转染，是通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。

多数实验用大肠杆菌作为导入的受体细胞。

每次电转的时候都有些紧张，怕听到爆裂的声音（crack！而不是beep！）。注意电转用的电极杯要清洗干净并且是干燥的，还有质粒用酚氯仿异戊醇抽提，除盐。

电穿孔的成功很大程度上取决于质粒溶液的纯度，特别是其盐浓度。盐浓度过高时，转化的time constant（电转时间常数对于大肠杆菌一般是5 msec左右）很低，转化失败（开孔不够，质粒没能导入）。

如果你构建质粒的原材料很宝贵，不能用来重复实验了，可以尝试收集起所有转化失败的混合物（质粒和大肠杆菌）来挽救。重新抽提，甚至抽提之后重新溶解在更多水里再去做转化（降低盐浓度）。

当然电穿孔成功还和很多因素有关，比如电极杯的两极距离，受体细胞类型、状态及用量，电压大小。具体可以查实验室的电转仪器的指导手册，有的仪器针对不同的受体细胞设定了不同的工作模式。