siRNA

Pre:离心，10000rpm,2min
管里加Depc水
RNA oligo,加125ul depc水
NC,62.5 depc水
转染全程避光～

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跑Wb上样顺序：blank,NC, Sirna

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铺板：6孔板
细胞贴壁（一般6h）后，换无血清培养基（一般饥饿6-8h），等待长到50%，转染
3个序列，1个nc，1个lipo
每个序列，两个副孔

siRNA

转染时机：细胞长到超过50%（60%~70%）
白的是NC
小干扰7ul,nc5ul,
先配制：7ul小干扰混到250ul无血清培养基（257），lipo5ul配在125ul无血清培养基里（130ul）
上述两者混合10min左右，不能超15分钟
Blank. 375无血清培养基(可以不加)
total：s1:14ul+500ul， lipo10ul+250ul
s2:14ul+500ul， lipo10ul+250ul
s3:14ul+500ul， lipo10ul+250ul
nc：10ul+500ul，lipo10ul+250ul

滴管吸细胞里面的带血清的培养基，pbs洗细胞，
每个加1ml无血清培养基

小干扰混匀完毕 ，加入细胞内
6-8小时之后换含血清培养基（10%比例）,转染后6h即可看转染效率。荧光显微镜

48h后（长到90%）收蛋白RNA, protein
收蛋白：Pbs各个孔再加1ml，用来洗细胞，把两个孔的细胞放在一个ep管里
提取细胞沉淀，3000rpm,5min

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1.配液
2.lipo和转染试剂混5min
3.洗细胞：吸出血清，加无血清培养基液1ml洗两遍，加在壁上。加1ml培养基液

4.加配好的试剂，等待 20min。一定不能超时。
加液体，6小时之后换血清培养基
等长 到90%,收细胞。 长1－2天？看细胞种类

收之后，
PBS. 洗细胞1遍
Tbst。WB
NC blank. 各设几个？？？
随意，nc4个，blank 2个

95%酒精，酒精灯
其他75%
灌满酒精
拿进去的东西要喷
滴管，离心管，冻存管，照15分钟