细胞永生化的常用方法

原代细胞培养周期非常有限，数次分裂即衰老，细胞停止增值。解决细胞有限传代的问题，很多实验的开展难度将大大降低，本文为您介绍2种最为常规的细胞诱导永生化的方法。

SV40 LargeT 介导的永生化细胞

SV40（simian virus 40）是猿猴肾细胞病毒，SV40编码两种肿瘤抗原(tumor antigen，T抗原)，其分子量分别为94000(大T抗原)和17000(小T抗原)。T抗原的作用是：①大T抗原为细胞转化的启动所必需;②转化细胞表型的维持必需要有大T抗原的连续表达;③小T抗原对于细胞的转化不是必需的，但可起加强作用。因此，SV40 Large T 能使细胞进入永生化的增殖状态，是常用且有效的体外细胞转化因素之一，已广泛应用于各种人类细胞类型的永生化。

SV40 T抗原已被大量细胞验证是细胞永生化最简单有效的试剂，其机制相对容易理解。HEK293T（293T）细胞名称中的T，便是已经稳转SV40 T抗原的意思，值得注意的是293T细胞转化SV40 T时带入了NEO抗性，使其对G418具有永久的耐药性，携带SV40 Large T基因的细胞系，可支持有SV40复制子的质粒在细胞内复制，延长质粒的表达周期同时可提高表达丰度，例如pcDNA3.1+。

hTERT介导的永生化细胞

端粒酶逆转录酶cDNA（human telomerase reverse transcriptase, hTERT），可以激活端粒酶活性，维持端粒长度，阻止染色体端粒降解，诱导细胞永生化，ATCC很多正常组织永生化细胞均通过hTERT介导获得。

hTERT介导的永生化细胞可保持正常细胞的生理特性，细胞仍然具有相应的表型和稳定的核型。而使用原癌基因导致细胞永生化的，细胞往往会发生核型变化，特别是当细胞被多次传代以后。通过hTERT介导的永生化细胞可以观察到以下特性：

1. 正常细胞周期控制；

2. 接触抑制；

3. 锚定依赖；

4. 保留对血清和有丝分裂原的正常生长反应；

5. 需要生长因子进行增殖；

6. 具有正常核型；

7. 没有与转化相关的变化，如致瘤性，可以在软琼脂上生长。

综上所述，SV40-T介导永生化简单粗暴，获得永生化的效率更高；hTERT介导的永生化细胞可保持正常细胞的生理特性，细胞仍然具有相应的表型和稳定的核型。