酶无法切开质粒是什么原因

首先确定酶切位点是否甲基化，甲基化一般常见有Dam（GmATC），Dc^m（C^mWGG，W=A或T）和CpG（^mCG），在酶切位点选择时尽量避免如：XbaI（TCTAGA）（Dam）,ClaI（ATCGAT），BclI（TGATCA），ApaI（GGWCC），SfiI（GGCCNNNNNGGCC），StuI（AGGCCT）等位点切割；无法避免这类酶切位点的，需将质粒转化甲基化缺陷型的细胞再抽提制备质粒，常用的Dam^-/Dcm^-细胞如：GM2163（E4105S），ER2925，JM110等。