Methods

产孢及分生孢子梗观察

2021-10-30  本文已影响0人  Han_zh

无性产孢是很多丝状真菌常见的生殖方式,菌丝从菌丝体上生出,特化形成分生抱子梗,分生孢子梗末端通过重复的不对称有丝分裂生出成串的或成簇的孢子,即分生孢子。通常情况下,分生孢子是单倍体,在合适条件下可独立发育为完整个体,同时兼备长期生存能力和对基因组保护的生物学功能,这些专口的无性结构的形态是一个特定的物种最重要的特征。


丝状真菌产孢机制研究表明,brlA、abaA和wetA共同构成了产孢过程的中央监管调控途径。其中,brlA编码C2H2锌指转录因子能够调节产孢过程中早期发育相关的基因并启动分化;在孢子产生的中间阶段,brlA激活abaA,在分化及瓶梗的产生过程中发挥着重要作用。在产孢形成的后期阶段wet被AbaA诱导,其参与细胞壁的形成及分生孢子的成熟过程,增强孢子抵御外界胁迫的能力。


分生孢子梗结构观察:取50 μL现配的孢子悬浮液,在PDA固体平板上涂布均匀,之后将灭菌盖玻片倾斜插入(倾斜角度约45度)上述涂布有孢子的固体平板上(为增加观察样本数,同一平板上可同时插入多个盖玻片),使菌丝沿盖玻片和培养基交接处生长而附着在盖玻片上。25℃黑暗培养约1.5 d后,进行制片观察。用镊子将平板上的插片按其原有倾斜方向轻轻取出,并反扣在滴有PBS缓冲液的洁净载玻片上,吸水轻压后置于荧光显微镜下观察其在自然生长状态下的分生孢子梗结构。

顶囊,瓶梗,瓶基,分生孢子梗,分生孢子,足细胞.png
The life cycle and distinct morphological states of A. fumigatus.png P. expansum 分生孢子梗结构.png
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