组织提RNA有所进展，加油！

2019年1月15日，星期二，晴
今天上午收到了厦门师弟WZG同学送过来的510和140细胞。不过令人惊奇的是，他居然只有了几个冻存管装了细胞，运输过程中也没有采取保温措施。将细胞放在培养箱过度一小时以后，将其转移到培养瓶中，希望细胞大哥一定得要好好的。（当然，这个过程免不了请我同学PZP来帮忙，同时心内的ZYY也在旁边指点，纠正一些操作的不足之处）。另外，今天看het细胞，背景也很清晰，长势还挺喜人的（高手就是高手，我同学操作没问题）。从明天开始，我就准备把het细胞冻存一部分起来了，希望这部分细胞能为我的实验助一臂之力！！

上午还有一件开心的事，昨天坚持到很晚做完的免疫组化，其效果经过中心实验室WXT老师鉴定之后是合格的，并且将浓度梯度定在1比500（和说明书的一样）。其实昨晚我已经把载玻片订购下去了，还和试剂商讨价还价了一把。可惜，今天才过来几盒而已。

临近中午，我还专门请泌尿外科ZB同学帮我指导一下如何提取组织RNA。同样操作方法，可是自己却没有做好，太惭愧了。这次操作的主要精髓是没有用液氮研磨，而是直接把组织放研钵中，同时加入trizol，不断研磨，直至不见组织块，随后将液体转移到离心管中。紧接着是加入氯仿，（此前我是离心5分钟，去掉组织块），剩下的步骤里都一样了，通过这个方法，先后用两种仪器测量结果，都挺满意。先使用的酶标仪测得浓度大概在1000左右，纯度在1.9左右；微量分光光度仪，浓度是900左右，纯度也是1.88左右。不过微量分光光度仪器，今天也同样出现了那个三角形，但是这个三角形不是提示苯酚，而是胍类的东西。我估摸是trizol加多了，因为当时一开始用了1ml，研磨后又加了500ul，所以下回还是要严格控制一下这个trizol用量。受此鼓舞，下午我让师弟HGL医生帮我重取了食管组织标本。（似乎看到了实验成功的曙光了。）

在此期间，我还去科室把液氮罐整理了一下，以后细胞冻存就有着落了，不用担心放在负80度冰箱，保存时间不久的问题了。（细胞在负80度，保存时间两个月，而在液氮中可至少两年）

下午借用了别人的血清，重新配制了培养液。希望这会细胞好好的。另外一部分血清借我同学PLR试用，鉴定血清的品质。

傍晚，联系了病理科QXW老师，准备周六切蜡块，所以把送过来的载玻片登记好了部分病人信息。

晚上，还联系了SZM，了解细胞复苏状况。惊喜获悉他即将当爸爸了，在此提前恭喜了。他让LZ师弟帮我处理细胞，而我麻烦DF同学帮我取回来，一下子细胞要凑齐了，有点感觉像支付宝每年的集五福的游戏。

另外，考虑到载玻片很多，切片回来需要冷藏，故还需订购一台冰箱为宜。已和ZB联系了，他表示可以，但需要和研究所的HQY确认一下。