免疫共沉淀实验和亲和纯化的区别是什么?分别适用于什么的蛋白质相互
2020-12-21 本文已影响0人
一口亅
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答:免疫共沉淀实验与亲和纯化的区别:
(1)免疫共沉淀以抗体和抗原之间的特异免疫反应为基础,验证两个蛋白质是否在细胞内天然结合;亲和纯化不用引入抗体。
(2)免疫共沉淀纯化瞬时且较弱相互作用的配体,亲和纯化用于纯化稳定蛋白质复合物的亚基。
(3)免疫共沉淀实验强度较低,假阳性率较高;亲和纯化强度较大,效率很高,而且可以在成分复杂的混合物中提取出目的蛋白。
(4)免疫共沉淀只能用于验证,不可以发现新的相互作用;亲和纯化可以发现新的相互作用。
免疫共沉淀适用于瞬时的,较弱的蛋白相互作用,亲和纯化难以检测瞬时的蛋白相互作用,更适合于稳定的蛋白复合物中蛋白的相互作用。免疫共沉淀的原理是形成“目的蛋白-兴趣蛋白-兴趣蛋白抗体-SPA/Pansobin”的复合物,由于SPA/Pansobin较大,在离心时会沉淀下来,因此在分离时不需要较大的外力,对相互作用的破坏较小,因此可以检测弱的相互作用;亲和纯化是通过共价键将与底物专一性可逆结合的配基偶联到基质,配基与混合物中的底物结合后,改变化学条件将其他混合物洗掉,这一过程中如果配基与底物结合的不牢固,就会被同时洗掉,因此只能用于强的相互作用。